הערכה של קוליטיס הנגרמת על ידי כימיקלים באמצעות ניתוח אימונוהיסטוכימי של קטעי רקמת המעי הגס

בעכברים, שכבת רירית המעי הגס מורכבת מתאי חיסון המכילים למינה פרופריה, מוקפים באפיתל ארוז היטב המגן על הרירית. טיפול כימי בנתרן גופרתי דקסטרן משבש צמתים הדוקים, גורם לנזק לתאי האפיתל ומאפשר לחיידקים לומינליים לחדור ללמינה פרופריה.

זיהוי מיקרוביאלי במעי הגס מעורר הפרשת כימוקין, מה שמוביל לחדירה של תאי חיסון ולשחרור ציטוקינים פרו-דלקתיים. התגובה החיסונית המוגזמת הזו גורמת לדלקת במעי הגס או לקוליטיס.

כדי להעריך קוליטיס הנגרמת על ידי כימיקלים, התחל עם מגלשת זכוכית הנושאת קטע קבוע ומטופל מראש של רקמת המעי הגס של העכבר המציג קוליטיס הנגרמת על ידי כימיקלים. טפל בקטע עם קוקטייל של נוגדנים ראשוניים ספציפיים לקולטנים של תאי חיסון הנקשרים לתאי החיסון שלהם.

יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים. דגרו על קטע הרקמה עם נוגדנים משניים ביוטיניליים, הנקשרים במיוחד לנוגדנים הראשוניים. דגירה עם מצומדים של אנזים סטרפטווידין, המקיימים אינטראקציה עם ביוטינים, ויוצרים קומפלקסים.

כיסו את קטע הרקמה במצע כרומוגני; האינטראקציה בין אנזים למצע מעניקה צבע חום לתאי החיסון. מכתים את החלק בצבע המטוקסילין כדי להכתים את גרעיני התא.

התבונן בשקופית המוכתמת תחת מיקרוסקופ. שפע תאי החיסון החומים באזור הפגוע מעיד על קוליטיס הנגרמת על ידי כימיקלים.

לניתוח אימונוהיסטוכימי, לאחר חימום החלקים למשך 20 דקות על הפלטה החמה, יש לשטוף