הריגת תאי K562 על ידי תאים חד-גרעיניים היקפיים בדם שנחשפו לתכשירי מוצרי טבק

תאי גידול מפעילים תאי חיסון אפקטורים כדי לשחרר ציטוקינים וגרגירים ציטוליטיים המכילים פרפורין וגרנזימים. פרפורין יוצר נקבוביות בקרום תא הגידול, מקל על כניסת גרנזים לתא ויוזם אפופטוזיס, וגורם למוות של תאים.

כדי לנתח את התפקוד הציטוליטי של תאים חד-גרעיניים בדם היקפי אנושי, PBMCs, לאחר הכנת מוצרי טבק, TPP, חשיפה, לוקחים צלחת מרובת בארות עם ריכוזי TPP הולכים וגדלים. באר המכילה מדיום משמשת כבקרה.

הוסף מתלה PBMC. החומר המדכא החיסוני העיקרי של TPPs, ניקוטין, נקשר לקולטני האצטילכולין הניקוטיניים של PBMCs, ומווסת את ייצור הציטוקינים הפרו-דלקתיים.

צנטריפוגה. הסר את ה-supernatant המכיל TPP. להשעות את ה-PBMCs בתקשורת. הוסף לבארות תאי K562 בעלי תווית פלואורסצנטית, תאים לוקמיים אנושיים בעלי רגישות מוגברת לציטוטוקסיות של תאי אפקטור PBMC.

תאי אפקטור שטופלו ב-TPP עם תגובות חיסוניות מדוכאות מציגים ביטוי מופחת של פרפורין ושחרור ציטוקינים, מה שמפחית את היכולת הציטוליטית של ה-PBMC.

צנטריפוגה. השעו מחדש את התאים במאגר ואחריו צבע פלואורסצנטי אטום לתאים. הצבע נכנס לתאים עם ממברנות שנפגעו ומכתים את ה-DNA.

בעזרת ציטומטר זרימה, קבע את שיעור תאי K562 המתים והחיים בבארות. אחוז נמוך יותר של תאי K562 מתים בבארות עם ריכוזי TPP גבוהים יותר מאשר הביקורת מצביע על דיכוי הרג תאי K562 על ידי PBMCs שטופלו ב-TPP.

לאחר הכנ