אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:33 דק׳ • July 8th, 2025
כדי להתחיל את בדיקת היחידה היוצרת מושבה, או CFU, לכימות חיידקים ברי קיימא, קח צלחת מרובת בארות המכילה מקרופאגים מתורבתים במצעי גידול. להדביק את המקרופאגים בליסטריה מונוציטוגנס, חיידק פתוגני המסוגל לצמוח תוך תאית.
במהלך ההדבקה, המקרופאגים בולעים את החיידקים, ומפנימים את החיידקים בתוך תא הקשור לממברנה - פגוזום.
חיידקים מפרישים רעלן היוצר נקבוביות ומשבשים את הממברנה הפגוזומלית. לפיכך, החיידקים מורשים להיכנס לציטוזול ולהשתכפל בתוך המקרופאגים.
טפל בקצרה במקרופאגים הנגועים בגנטמיצין, אנטיביוטיקה שמחסלת באופן סלקטיבי חיידקים לא מופנמים תוך שמירה על חיידקים תוך-תאיים.
שאפו את החומר שמעליו המכיל אנטיביוטיקה. לאחר מכן, הוסיפו מים מזוקקים סטריליים מעל המקרופאגים הנגועים, וצרו סביבה היפוטונית. זה מוביל לאוסמוזה, שבה מולקולות מים נכנסות לתאים וגורמות לליזה של מקרופאגים, ומשחררות את הרכיבים התוך תאיים, כולל החיידקים.
לפזר את ליזט התא המכיל חיידקים תוך-תאיים על צלחת האגר הליזוגנית, לקדם את ההפרדה של תאי חיידקים בודדים ולאפשר את צמיחתם העצמאית. במהלך הדגירה, חיידקים ברי קיימא גדלים על פני השטח של האגר ויוצרים מושבות נפרדות.
ספרו את המושבות בצלחת וקבלו את ה-CFU, המייצג חיידקים תוך-תאיים שחמקו מהתגובה החיסונית של המארח והשתכפלו בהצלחה בתוך המקרופאגים הנגועים.
לקציר, הטה מעט את המנה והשתמש בזהירות בפ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים