אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:21 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת מרובת בארות המכילה תרבית מקרופאגים. להדביק עם ליסטריה מונוציטוגנס המבטא חלבון פלואורסצנטי, Lm.
חלבונים על Lm נקשרים לקולטני מקרופאגים ספציפיים, ומפנימים את החיידקים בתוך פגוזום. בנוסף, Lm מפריש רעלנים יוצרי נקבוביות המשבשים את קרום הפגוזום, ומשחררים חיידקים לתוך הציטוזול, שם הם משתכפלים ומוקפים בחוטי אקטין מארחים.
חלבוני ה-ActA הגורמים להרכבת אקטין על Lm גורמים לפילמור אקטין מתמשך בקצה האחורי של החיידק. זנב שביט האקטין שנוצר מניע את Lm דרך הציטוזול וחודר לקרום תא המקרופאגים, ומשחרר Lm עטוף אקטין מפולימר למדיה.
לאחר הדגירה, אסוף וקבע את המדיה החוץ-תאית, הקשורה לאקטין, המכילה Lm ממערכת בארות. תקן את ה-Lm באמצעות פרפורמלדהיד. הוסיפו מים מזוקקים, קרעו את המקרופאגים ושחררו את ה-Lm התוך-תאי. אסוף את ה-Lm התוך-תאי ותקן את הדגימה באמצעות פרפורמלדהיד.
בבארות אחרות, החלף את המדיה במדיה המכילה גנטמיצין אטומה לתאים כדי לחסל Lm חוץ-תאי. מחליפים במדיה טרייה ודוגרים לתקופה הרצויה.
לאחר הדגירה, אסוף את המדיה המכילה Lm החוץ-תאית וקבע את הדגימה עם פרפורמלדהיד. השתמש במים מזוקקים כדי להשיג ליזאט המכיל Lm תוך-תאי ולתקן את הדגימה עם פרפורמלדהיד. הוסף לדגימות פלואידין עם תווית פלואורסצנטית, שנקשר באופן סלקטיבי לאקטין מפולימר.
בעזרת ציטומטר זרימה, דמיין אותות פלואורסצנטיים מ-Lm ופאלודין קושר אקטי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים