הדבקת זבובים בתרחיף חיידקי באמצעות ננו-מזרק

כדי להדביק זבובים, התחל עם מחט זכוכית בקוטר צר מלאה בשמן מינרלי.

אבטח את המחט על בוכנת הננו-מזרק עם טבעת O ומרווח להזרקה מדויקת ומבוקרת, מה שמבטיח נזק מינימלי לזבובים.

שחררו את השמן המינרלי, והשאירו כמות קטנה במחט כמחסום בין תמיסת החיידקים למזרק. טען את המחט בתרחיף החיידקים.

מקם צד גחון של Drosophila melanogaster מורדם כלפי מעלה.

הזרקו את המחט לבטן הקדמית של הזבוב, חודרים דרך הקוטיקולה ושכבת האפיתל. העבירו את התרחיף החיידקי לתוך ההמוקואל - חלל גוף המכיל המולימפה - נוזל מחזור דם עשיר בחומרים מזינים.

בתוך ההמוקול, תאים חיסוניים הנקראים המוציטים, מסתובבים לצד גוף השומן, רקמה מיוחדת המצוידת בקולטנים לזיהוי דפוסים.

אפשר לזבובים המוזרקים להתאושש במדיום המכיל בקבוקון. חיידקים מוזרקים מנצלים את חומרי המזון מההמולימפה ומתרבים, מגדילים את עומס החיידקים ויוצרים זיהום מערכתי.

קולטני תאי גוף שומן מקיימים אינטראקציה עם אנטיגנים חיידקיים, ומעוררים תגובה חיסונית לייצור פפטידים אנטי-מיקרוביאליים, ובסופו של דבר מחסלים חלק מהחיידקים.

המוציטים במחזור מבצעים פעילות פגוציטית, בולעים ומפרקים כמה חיידקים. אולם חלק מהחיידקים מתחמקים מהתגובה החיסונית של המארח ושורדים בתוך הזבובים, ויוצרים זיהום חיידקי.

הכן מחט זכוכית על ידי משיכת נימי זכוכית בורוסיליקט, והשתמש במלקחיים כדי לנתק את קצה המחט ליצירת פתח בקוטר 50 מיקרומטר. לאחר מכן, הנח את טבעת ה-O האיטום ואת המרווח הלבן, כשהגומה הגדולה פונה כלפי חוץ, על בוכנת המתכת של המזרק. מלאו את מחט הזכוכית בשמן מינרלי בעזרת מזרק עם מחט בגודל 30.

לאחר מכן, הנח את מחט הזכוכית המלאה דרך הקולט והנח את טבעת ה-O הגדולה יותר סביב בסיסה, 1 מילימטר מהקצה הקהה של המחט. החלק את המחט על בוכנת המתכת והברג בעדינות את הקולט עד שהוא מאובטח.

הוצא את השמן המינרלי מהמזרק והשאיר נפח קטן של שמן במחט כדי לשמש כמחסום בין המזרק לתרחיף החיידקים. ודא שאין בועות אוויר בתוך השמן המינרלי, תרחיף החיידקים או בין שני הנוזלים. לאחר מכן, הגדר את המזרק לנפח הרצוי להזרקה. הכנס בזהירות את קצה המחט הנימים לצינור של PBS סטרילי, ולחץ על כפתור המילוי במזרק כדי למלא את מחט המזרק.

כדי ליצור בקרות פציעה, הזריק זבובים מורדמים עם PBS סטרילי בבטן הקדמית על פני השטח הגחוניים. הניחו את הזבובים המוזרקים לתוך בקבוקונים טריים עם מדיה חדשה, והניחו את הבקבוקונים על צדם כדי למנוע מהזבובים להידבק למזון לפני שהם מתאוששים מההרדמה שלהם. לאחר מכן, הוציאו את המדיה הסטרילית שנותרה מהמזרק, ומלאו מחדש את אותה מחט בתרחיף החיידקים. חזור על ההליך והזריק לזבובים את תרחיף החיידקים.