מדידת עומס חיידקי E. coli ב- Drosophila melanogaster בעקבות זיהום E. coli

התחל עם זבובי Drosophila melanogaster בוגרים שהוזרקו עם E. coli. בנקודות הזמן הרצויות לאחר ההזרקה, העבירו זבובים מורדמים לצינורות מיקרו-צנטריפוגות נפרדים על קרח, והפחיתו את פעילותם המטבולית.

הוסיפו חיץ והומוגניזציה של הזבובים, פירקו את הרקמה, שחררו E. coli ומיקרוביוטת מעיים אנדוגנית.

העבירו כל זבוב המכיל E. coli להומוגנאט לבארות צלחות מרובות בארות. מלאו את הבארות הנותרות במאגר. בצע דילול סדרתי של ההומוגנט המכיל E. coli.

הפקידו את התרחיף ההומוגני המדולל מכל באר ככתמים נפרדים על צלחת אגר מזינה, החל מהדילול הנמוך ביותר. אפשר לכתמים להיספג באגר. דגרו על הצלחת למשך הלילה כדי לאפשר הכפלה של E. coli, וליצור מושבות גלויות. משך הדגירה הוא קריטי למניעת היווצרות מושבות מיקרוביוטת המעיים האנדוגניות של הזבוב.

ספרו את מושבות ה-E. coli עבור כל זבוב מהדילולים עם מושבות שאינן חופפות למנייה. חשב את היחידה היוצרת מושבה - העומס החיידקי הבר-קיימא - בהומוגנאט ההתחלתי בנקודות זמן שונות לאחר ההזרקה.

ירידה בעומס E. coli לאורך זמן מצביעה על פינוי חיידקים על ידי מערכת החיסון של הזבוב.

הנח תת-קבוצה של הזבובים הנגועים בצינורות מיקרו-צנטריפוגות בודדים על קרח. הוסף 250 מיקרוליטר PBS לכל צינור, והשתמש בעלי כדי להומוגניזציה של הזבובים. לאחר מכן, צלחו את ההומוגנאט על צלחת אגר LB באמצעות פלטת ספירלה.

לחלופין, כדי לצ