אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:23 דק׳ • July 8th, 2025
נגיף Drosophila C, או DCV, נגיף RNA חד-גדילי חיובי, מדביק בדרך כלל את Drosophila melanogaster.
במהלך ההדבקה, DCV משתמש במנגנון התא המארח כדי לשכפל את הגנום הנגיפי, ובסופו של דבר מייצר חלקיקי נגיף. תאים נגועים מציגים השפעות ציטופתיות, CPE, ועוברים ליזה או מתים ללא ליזה עקב חוסר יכולתם להתחלק.
כדי לקבוע את המינון הזיהומי הממוצע של תרבית רקמת הנגיף, ריכוז ה-DCV שבו מחצית מהתאים הנגועים מציגים CPE, מתחיל עם תרחיפי DCV מדוללים סדרתיים.
העברה לצלחת מרובת בארות המכילה תאי Drosophila S2* דביקים למחצה שמקורם בעוברים בשלב מאוחר של Drosophila melanogaster, מארח DCV טבעי. בארות המכילות מדיום ותאים משמשות כבקרות שליליות.
דגירה כדי שהנגיף ידביק את התאים. תאים נגועים בנגיף מציגים CPE באמצעות נזק לתאים ומוות. לאחר הדגירה, התבונן בבארות מתחת למיקרוסקופ.
זיהוי בארות חיוביות ושליליות ל-CPE על פני דילול. השתמש בשיטה מתאימה כדי לקבוע את המינון הזיהומי הממוצע של תרבית רקמת הנגיף של DCV.
כדי לקבוע את המינון הזיהומי הממוצע של תרבית רקמת הנגיף, ראשית, זרע תאי כוכב 1 x 105 S2 ב-100 מיקרוליטר של מדיום שלם לשמונה בארות לכל עמודה ב-12 שורות של צלחת של 96 בארות. לאחר מכן, החזר את הצלחת לחממה של 25 מעלות צלזיוס.
בחר באופן אקראי חמש שפופרות של וירוס מאחסון מינוס 80 מעלות צלזיוס. בזמן שהתאים מתייצבים, מלאו 10 צינו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים