אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:32 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה נויטרופילים עם תווית פלואורסצנטית וטפל בהם בסרום מטופל המכיל נוגדנים ציטופלזמיים אנטי-נויטרופילים.
נוגדנים אלה מקיימים אינטראקציה עם קולטני ה-Fc של הנויטרופיל, מפעילים מסלול איתות, מייצרים מיני חמצן תגובתיים או ROS ומפעילים פפטידיל ארגינין דימינאז.
ROS גורם לדה-גרנולציה של נויטרופילים, ומשחרר אנזימים - אלסטאז ומיאלופרוקסידאז לתוך הציטופלזמה. אנזימים אלה ופפטידיל ארגינין דימינאזות מופעלות עוברים לגרעין.
אלסטאז מבקע את היסטון-H1, ומיאלופרוקסידאז משנה היסטונים, ומתחיל עיבוי כרומטין. פפטידיל ארגינין דימינאז מופעל גורם להיסטון ציטרולינציה, ממיר שאריות ארגינין לציטרולין ותורם להמשך העיבוי.
הכרומטין המעובה מתערבב עם חלבונים תוך-תאיים, כולל חלבונים אנטי-מיקרוביאליים וציטופלזמיים. מאוחר יותר, קרום הנויטרופיל מתפרק, ומשחרר כרומטין מפורק מעורבב עם חלבונים ציטופלזמיים לחלל החוץ-תאי, ויוצר מלכודת חוץ-תאית נויטרופילית, NET.
הוסף צבע DNA אטום לתאים, הקשור אך ורק ל-DNA חוץ-תאי ב-NETs. תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, נויטרופילים מופיעים באדום עם מבנים ירוקים דמויי רשת חוץ-תאיים, המאשרים היווצרות NET.
צור תרחיף תאים בצפיפות של 420,000 תאים למיליליטר במדיום RPMI-1640 נטול אדום פנול המכיל 2% FCS. הוסף 37,500 נויטרופילים ב-90 מיקרוליטר לכל באר של צלחת שחורה עם תחתית שטוחה של
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים