בידוד שומנים מנויטרופילים שמקורם בדם אנושי על ידי הפרדה ביפאזית

קח צינור זכוכית המכיל נויטרופילים הומוגנט עם רכיבים תוך-תאיים משוחררים.

הוסף מתנול, ממס קוטבי, המשבש אינטראקציות שומנים-שומנים ושומנים-חלבון. הקוטביות המובנית של מתנול מפיצה באופן שווה שומנים קוטביים, וממיסה אותם. לאחר מכן, הוסף כלורופורם, ממס אורגני לא קוטבי, המקיים אינטראקציה עם שומנים לא קוטביים, וגורם להם להתפזר ולהמיס.

צנטריפוגה להפרדת הגלולה המכילה חלבון מהסופרנטנט המכיל שומנים, פוליסכרידים ופסולת תאים. העבירו את הסופרנטנט לצינור זכוכית טרי. מוסיפים כלורופורם ומים מזוקקים. צנטריפוגה את המדגם.

תוספת מים יוצרת באופן ספונטני מערכת דו-פאזית, המחלקת ביומולקולות בתוך שכבות הכלורופורם התחתונות והשכבות העליונות של מים-מתנול.

שכבת הכלורופורם מורכבת משומנים לא קוטביים מומסים, ואילו השכבה העליונה מכילה מזהמים שאינם ליפידים ושומנים קוטביים יותר. הסר את שכבת המים-מתנול העליונה מבלי להפריע לשכבה המכילה שומנים.

השתמש ברכז ואקום כדי להסיר את הממס מהשומנים. יש לאחסן בטמפרטורות נמוכות יותר עד לשימוש נוסף.

כדי לבודד את השומנים מהנויטרופילים שמקורם בדם היקפי אנושי, קחו את הנויטרופילים המוכנים והניחו אותם על קרח. הכניסו את הנויטרופילים לצינור זכוכית עם מכסה בורג של 15 מיליליטר עם אטם PTFE, והפכו אותם להומוגניזציה על ידי ניעור למשך דקה אחת. לאחר מכן, הוסיפו 2 מיליליטר מתנול, ואחריהם דקה לאחר מכן 1 מיליליטר כלורופורם. לאחר ניעור של דקה נוספת, סובב את צינורות הזכוכית בטמפרטורת החדר ו -50 סל"ד למשך 30 דקות.

לאחר מכן, גלולה את חלק החלבון על ידי צנטריפוגה של התמיסה ב -7 מעלות צלזיוס ו -1952 פעמים גרם למשך 10 דקות. שפכו בזהירות את הסופרנטנט לתוך צינור בורג זכוכית חדש של 15 מיליליטר והשאירו את הגלולה המכילה חלבון מאחור. אחסן את הגלולה במינוס 20 מעלות צלזיוס לכימות עתידי.

הוסף 1 מיליליטר כלורופורם והמתן דקה אחת. לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר מים מזוקקים כפולים והפוך את צינור מכסה בורג הזכוכית עם הדגימה למשך 30 שניות. לאחר צנטריפוגה של הדגימה כמו קודם, הסר והשליך את השלב העליון למטה אך לא כולל השכבה העכורה. יבש את הדגימות ברכז ואקום ב-60 מעלות צלזיוס ואחסן אותן במינוס 20 מעלות צלזיוס עד הצורך.