מערכת זיהום חדירה המבוססת על החדרת ממברנה לחקר ההשפעה של רעלנים חיידקיים

קח מערכת זיהום דו-קאמרית המופרדת על ידי הכנסת קרום חדיר. התא התחתון מכיל קרטינוציטים אנושיים דביקים, או תאי עור.

הוסף פתוגנים חיידקיים בתא העליון, ודגר. הממברנה מונעת מגע ישיר של הפתוגנים עם הקרטינוציטים. פתוגנים מפרישים סטרפטוליזין S או SLS - רעלן קטן - החוצה את הממברנה כדי להגיע לתאים.

הטרנספורטר המשותף של נתרן ביקרבונט על קרטינוציטים מתווך את זרם יוני הביקרבונט והנתרן, ושומר על pH תוך תאי. SLS נקשר לטרנספורטר המשותף ומשבש את הובלת היונים, מה שמוביל ללחץ אוסמוטי תוך תאי.

האיתות במורד הזרם המושרה על ידי מתח גורם לפירוק המעכב הקשור לגורם גרעיני-Kappa B מבודד, או NF-κB, מה שמוביל להפעלתו. ה-NF-κB המופעל עובר לגרעין, מה שמוביל לוויסות יתר של ייצור ציטוקינים פרו-דלקתיים.

עם הפרשה חוץ-תאית, הציטוקינים נקשרים לקולטני מוות בתא המארח, ומתחילים נמק. לאחר הדגירה, קצרו את התרבית כדי להעריך את ההשפעה של רעלן החיידקים.

מיד לפני הטיפול, השתמש ב-1X PBS כדי לשטוף את התאים. לאחר מכן, יש למרוח 2 מיליליטר של מדיום גידול טרי עם או בלי טיפול תרופתי על צלחות שש הבארות, או 0.5 מיליליטר מדיום על הבארות של צלחות 24 בארות. לאחר מכן, מתחת למכסה המנוע השתמש במלקחיים סטריליים כדי להניח בזהירות תוספת קרום חדירה סטרילית של 0.4 מיקרון לכל באר.

טיפול עדין וסטרילי בתוספות החדירות במהלך הכנת הזיהום הוא קריטי כדי למ