ניתוח סינפסות חיסוניות בין תאי T אנושיים ותאי ראג'י טעונים SEB באמצעות ציטומטריית זרימת הדמיה
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:28 דק׳ • July 8th, 2025
קח צינורות ציטומטריית זרימה המכילים תאי ראג'י לא טעונים ותאי ראג'י Staphylococcus aureus enterotoxin B או תאי ראג'י טעונים SEB.
תאי ראג'י אלה טעוני SEB מתפקדים כתאי B חלופיים המציגים אנטיגן המכילים את הסופר-אנטיגן SEB המורכב למולקולות MHC מסוג II.
דגירה עם פאן-לויקוציטים.
קולטני תאי T, TCRs על תאי T נקשרים ל-SEBs בתאי ראג'י, אשר, יחד עם אותות מעוררים משותפים, יוצרים צומת תא-תא יציב, סינפסה חיסונית, המובילה להפעלת תאי T.
זה מפעיל מסלולי איתות תוך-תאיים, הגורמים לסידור מחדש של שלד הציטו של האקטין, עם אשכול של מולקולות איתות וקולטני פני השטח בתוך הסינפסה.
לאחר הדגירה, תקן את התאים כדי לשמר את המבנים התאיים שלהם. לחדור לתאים כדי לגשת למטרות תוך-תאיות.
הוסף נוגדנים נגד CD3 עם תווית פלואורופור, פלואידין ו-DAPI, הנקשרים ל-CD3 בקומפלקס TCR, חוטי אקטין ו-DNA, בהתאמה.
באמצעות ציטומטר זרימת הדמיה, דמיין אותות פלואורסצנטיים מ-CD3 ואקטין כדי לקבוע את העשרתם בסינפסה בנוכחות SEB.
התחל בערבוב מיליליטר אחד של דם היקפי אנושי טרי עם 30 מיליליטר של מאגר ליזה ACK בצינור חרוטי של 50 מיליליטר. לאחר שמונה דקות בטמפרטורת החדר, מלאו את הצינור ב-PBS לשטיפת צנטריפוגה, והשעו מחדש את הגלולה בשני מיליליטר של מדיום תרבית למשך 60 דקות דגירה ב-37 מעלות צלזיוס.
בתום הדגירה, הוסף 5 x 105 Staphylococcus aureus enterot
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים