מודל זיהום מקרופאגים ממוין לחלוטין של תאים שמקורם במונוציטים עם Mycobacterium tuberculosis
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:36 דק׳ • July 8th, 2025
השג תרבית של מקרופאגים מובחנים לחלוטין בצלחת מרובת בארות. למקרופאגים אלה יש סמנים על פני השטח, כגון קולטנים דמויי טול או TLR-2 - קולטן לזיהוי דפוסים המזהה רכיבים מיקרוביאליים שונים.
הוסף כמות מתאימה של Mycobacterium tuberculosis או תרחיף תאי Mtb המסומן פלואורסצנטי לכל באר ודגירה.
TLR-2 מזהה ליפוארבינומנן, או LAM, מרכיב גליקוליפיד מורכב של דופן התא Mtb, ויוזם פגוציטוזיס. המקרופאג מפנים את Mtb, ומבודד את החיידק בתוך פגוזום - תא הקשור לממברנה.
הפגוזום מתבגר, על ידי התמזגות עם ליזוזומים, ויוצר פגוליזוזום - תא חומצי ועשיר באנזימות.
בתוך הפגוליזוזום, ה-Mtb מעכב את משאבת הפרוטונים מסוג וואקולרי האחראית ליצירת pH חומצי. כתוצאה מכך, ה-pH בתוך הפגוליזוזום הופך לכמעט ניטרלי, ומנטרל אנזימים המפרקים פתוגנים נבלעים.
האינטראקציה בין LAM ל-TLR2, משפיעה גם על מסלולי האיתות של התא המארח, מה שמוביל לאפנון של סמני פני השטח המעורבים בהצגת אנטיגן.
השבתת הפגוליזוזום ועיכוב התגובה החיסונית של המארח מאפשרים ל-Mtb להתקיים ולהשתכפל בתוך המקרופאגים.
כדי להדביק את התאים שמקורם במונוציטים, יש לדלל את החיידקים ל-5 פעמים 10 עד לריכוז המושבה השישית למיליליטר במדיום נטול סרום, ולהחליף את הסופרנטנט בכל באר של צלחת תרבית התאים בת שש הבארות, ב-1 מיליליטר של מדיום טרי נטול סרום ו-1 מיליליטר של תרחיף חיידקים לבאר כדי לה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים