מחקר לחקר תפקידו של ויטרונקטין בהיצמדות חיידקים לתאי אפיתל מארחים

קח צלחת מרובת בארות המכילה חד-שכבות תאי אפיתל דבקות. החלף את המדיה במדיה נטולת סרום, כדי למנוע הפרעות של חלבון בסרום. לאחר הדגירה, הסר מדיה. שוטפים את התאים עם מאגר. הוסיפו חומר חומר מקורר ללא סרום המכיל ויטרונקטין. דגירה בטמפרטורות נמוכות יותר.

תחום ה-N טרמינל RGD של ויטרונקטין נקשר לקולטני האינטגרין של פני תא האפיתל. טמפרטורות נמוכות יותר מעכבות הפנמה תאית של קומפלקס הוויטרונקטין-אינטגרין.

לאחר רוויית קולטן האינטגרין, יש להסיר את המדיה. שטפו עם בופר כדי להסיר עודפי ויטרונקטין שעלולים להשפיע על קשירת האינטגרין התלויה בוויטרונקטין החיידקי.

הוסף המופילוס אינפלואנזה מסוג f, או Hif, פתוגן חיידקי גרם שלילי, תרחיף. דגירה.

חלבון H על פני השטח של Hif נקשר לקצה C של הוויטרונקטין, מה שמקל על היצמדות ה-Hif לתא האפיתל והפנמה לאחר מכן.

הסר את המדיה ושטוף עם מאגר כדי להסיר Hif לא קשור. השתמש באנזים לניתוק תאים כדי לקצור את התאים. הוסיפו חומר המכיל סרום כדי לעצור את התגובה האנזימטית. העבירו את מתלה התא לצינור זכוכית המכיל חרוזי זכוכית. מערבולת לליזה של התאים, ומשחררת חיידקים מופנמים ומחוברים לפני השטח.

מדללים את הליזאט במדיה נטולת סרום וזרעים על צלחת אגר שוקולד. דגירה עבור Hif ליצירת מושבות. ספרו את המושבות.

מספר גבוה יותר של מושבות מעיד על היצמדות מוגברת של Hif לתאי האפיתל בנוכחות ויטרונקטין.

ת