קביעת תפקידו של ויטרונקטין בעמידות חיידקית לפעילות חיידקית של סרום אנושי

כדי לחקור את ההשפעה של ויטרונקטין - גליקופרוטאין בסרום אנושי, על חיידקים, התחל עם צינורות המכילים תרחיף המופילוס אינפלואנזה.

טפל בצינור אחד בסרום אנושי רגיל המכיל ויטרונקטין ובשני בסרום מדולל ויטרונקטין. שתי גרסאות הסרום מכילות נוגדנים וחלבוני השלמה שונים - החיוניים לפעילות חיידקים.

במהלך הדגירה, נוגדנים מקיימים אינטראקציה עם חלבוני פני השטח של החיידקים, ומפעילים חלבוני משלים ליצירת C5 convertase, המבקע את C5. C5b מתחבר ל-C6, ואחריו C7, ויוצר את קומפלקס C5b6-7. קומפלקס זה נקשר לקרום התא החיידקי ומגייס C8 ויוצר C5b67-8.

תהליך זה מקל על ההצמדה של מונומרים C9 והפילמור שלהם, ויוצר את קומפלקס התקפת הממברנה - מבנה יוצר נקבוביות. נקבוביות אלו גורמות לזרם של יונים ומים, מה שמוביל לליזה חיידקית.

לעומת זאת, בצינור עם סרום רגיל, ויטרונקטין נקשר לחלבון פני השטח של חיידקים המקיים אינטראקציה עם קומפלקס C5b6-7 ומונומרים C9. אינטראקציות אלו מונעות גיוס של C8 ופילמור של C9, מעכבות היווצרות קומפלקס של התקפות ממברנות ומובילות להישרדות חיידקים.

קח את תרחיף החיידקים הן מהצינורות והן מהתרבית על צלחות אגר בודדות.

מושבות החיידקים הגבוהות יותר בסרום המכיל ויטרונקטין מאשרות את תפקידו בעמידות חיידקים כנגד הפעילות החיידקית של סרום אנושי.

כדי לבצע ניתוח של עמידות תלוית ויטרונקטין לפעילות חיידקית של סרום אנושי, ראשית, תרבית וכדור של החיידקים כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לאחר צנטריפוגה, השעו מחדש את גלולת החיידקים עם נפח אחד של דקסטרוז ג'לטין מאגר ורונלי. כעת הוסיפו 1,500 CFU של חיידקים ל-100 מיקרוליטר של DGVB++ המכילים 5% סרום.

דגרו את הדגימה ב-37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות עם ניעור ב-300 סל"ד. הסר מנה של 10 מיקרוליטר מתערובת התגובה לאחר 0 דקות ו -15 דקות. מניחים את האליקוט על אגר שוקולד, ומדגרים את הצלחת בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. לאחר הדגירה של צלחות אגר השוקולד, ספרו את המושבות המופיעות על הצלחת, וחשבו את אחוז החיידקים שנהרגו כמתואר בפרוטוקול הטקסט.