כימות של אינטרפרונים ביו-אקטיביים מסוג I באמצעות בדיקת כתב אלקליין אלקליין מופרש

0 views • 3:11 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לכמת את האינטרפרונים הביו-אקטיביים מסוג I, כגון אינטרפרון-אלפא ואינטרפרון-בטא, בדגימת בדיקה, קח צלחת מרובת בארות המכילה תאי דיווח מהונדסים. תאים אלה מבטאים את הפוספטאז האלקליין העוברי המופרש, SEAP, גן מדווח בשליטת מקדם האינטרפרון-אלפא ובטא.

הוסף את דגימת הבדיקה המכילה ריכוז אינטרפרון מסוג I לא ידוע. פיפטה טווח של ריכוזי אינטרפרון מסוג I אנושיים לבארות אחרות, הפועלות כבקרות סטנדרטיות. דגירה.

אינטרפרון מסוג I בבאר הבדיקה נקשר לקולטן ספציפי על פני התא, ומפעיל את קינאזות ג'אנוס חלבונים קינאזות אלה מתמרי אותות זרחניים ומפעילים של חלבוני שעתוק, STAT, המתעמעמים ויוצרים קומפלקס עם גורם ויסות אינטרפרון ספציפי.

עם הכניסה לגרעין, הקומפלקס נקשר לרצף DNA ספציפי במקדם השראת אינטרפרון-אלפא ובטא, מפעיל את שעתוק הגן SEAP ומייצר את אנזימי ה-SEAP, המופרשים למדיה.

העבר את המדיה המכילה SEAP לבארות מרובות בארות בעלות מצע ספציפי ל-SEAP. SEAP מבצע הידרוליזה של המצע הוורוד, ומייצר מוצר בצבע סגול-כחול.

באמצעות קורא מיקרו-פלטות, מדוד את ספיגת המוצר בבארות הבדיקה ובבארות הסטנדרטיות, המעיד על רמות SEAP וריכוז אינטרפרון מסוג I.

מעקומת האינטרפרון הסטנדרטית מסוג I המשורטטת, קבע את ריכוז האינטרפרון הביו-אקטיבי מסוג I בדגימת הבדיקה.

כדי למדוד אינטרפרון ביו-אקטיבי מסוג I באמצעות תאי מדווח אינטרפרון-אלפא/בטא HEK-Blue, ראשית, יש לצלחת את תאי הדיווח בצפיפות של 50,000 תאים לבאר בצלחת תחתונה שטוחה של 96 בארות לנפח סופי של 180 מיקרוליטר. לאחר מכן, הוסף 20 מיקרוליטר של סופרנטנט תרבית משותפת שזה עתה נקטף לכל באר בשכפול. כלול סט של בקרות סטנדרטיות פנימיות, ודגר את הצלחת ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך 18 עד 22 שעות.

כדי לקבוע את רמות הפוספטאז האלקליין המשתחרר מתאי המדווח, הוסף 180 מיקרוליטר של תמיסת QUANTI-Blue לכל באר של צלחת תחתונה שטוחה חדשה. לאחר מכן, הוסף 20 מיקרוליטר של תאי אינטרפרון-אלפא/בטא המושרים HEK-כחול לכל באר, ודגר את הצלחת ב-37 מעלות צלזיוס עד להתפתחות צבע בבארות הבקרה הסטנדרטיות של אינטרפרון.

תמיסת QUANTI-Blue משתנה מוורוד לסגול-כחול בנוכחות האנזים. לבסוף, השתמש בספקטרופוטומטר כדי להעריך את רמות הפוספטאז האלקליין המופרש ב-620 עד 655 ננומטר ולקבוע את ריכוז האינטרפרון מסוג I על ידי אקסטרפולציה מהחלק הליניארי של העקומה הסטנדרטית של האינטרפרון.

06:46

בידוד של Exosomes מהפלזמה של HIV-1 אנשים חיוביים

Related Videos

0 Views

06:09

הדור של בוגר, בוגרת Tolerogenic דנדריטים תאים, עם שינוי פנוטיפים מטבולית

Related Videos

0 Views

07:55

תא עיתונאי מקרופאג שיטה לבחון קולטן שיחת כמו-תיווך NF-kB/AP-1 איתות על שכבות חלבון Adsorbed על משטחים פולימריים

Related Videos

0 Views

09:13

באמצעות גנטיקה הפוכה כדי לתפעל את ג'ין NSS של וירוס קדחת עמק השבר MP-12 מסננים כדי לשפר את בטיחות חיסון והיעילות

Related Videos

0 Views

13:41

השימוש באינטרפרון-γ Assay האנזים המקושר Immunospot לאפיין רומן T-cell אפיטופים של וירוס הפפילומה האנושי

Related Videos

0 Views

10:48

וירוסי כתב Vaccinia לכימות פונקציה ויראלי בכל השלבים של ביטוי גנים

Related Videos

0 Views

08:04

פיתוח של חסינות ELISPOT Assay להעריך γ-IFN אבעבועות רוח, זוסטר וירוס ספציפי לתא בתיווך לאחר השתלת דם טבורים

Related Videos

0 Views

10:00

תפוקה גבוהה בזמן אמת כמותי RT-PCR Assay לקביעת פרופילי ביטוי של סוגי I ו- III תת סוגי אינטרפרון

Related Videos

0 Views

11:44

רזולוציה גבוהה שיטה למעקב אחר הפעלת זירחון תלויה של IRF3

Related Videos

0 Views

09:35

פיתוח של מערכת Reporter וירוס הפטיטיס B לפקח בשלבים המוקדמים של מחזור שכפול

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026