אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:06 דק׳ • July 8th, 2025
התחל בתרבית מופשרת של Mycobacterium bovis BCG lux, זן ביולומינסנט מהונדס גנטית של Mycobacterium bovis מוחלש המבטא את האנזים המדווח לוציפראז.
חסנו את התרחיף לבקבוק תרבית המכיל את מדיום הגידול בתוספת אנטיביוטיקה של היגרומיצין. דגירה. BCG lux מכיל את הגן העמיד להיגרומיצין, מה שמקל על הישרדותו וצמיחתו.
לאחר הדגירה, הכינו דילול תרבית מתאים באמצעות חיץ בצינורות לומינומטר. מעבירים ללומינומטר, טעון בתמיסת מצע אלדהיד אליפטי ארוך שרשרת. במהלך הריצה, האלדהיד מוזרק לתרחיף המיקובקטריאלי שנכנס לתאים.
לוציפראז חיידקי מזרז את החמצון של פלבין מונונוקלאוטיד מופחת אנדוגני ואת האלדהיד, וכתוצאה מכך פליטת אור כחול-ירוק. עוצמת הביולומינסנציה הנמדדת מצביעה על הפעילות המטבולית של BCG lux ומתאמת למדד של חיידקים ברי קיימא או יחידות יוצרות מושבה, CFU.
לאחר מכן, צנטריפוגה את התרבות המיקובקטריאלית שנותרה. השעו מחדש את הגלולה המיקובקטריאלית במאגר המכיל חומר פעילי שטח לא יוני כדי למנוע גוש מיקובקטריאלי.
באמצעות מדידות הביו-לומינסנציה, יש לדלל את התרחיף כדי להשיג את צפיפות התאים הרצויה. הכינו דילולים סדרתיים של מיקובקטריות וצלחו אותם על צלחות אגר מזינות בתוספת היגרומיצין. דגירה, מה שמאפשר ל-BCG lux ליצור מושבות.
חשב CFU כדי לאשר מתאם עם עוצמת הביו-לומינסנציה. ניתן להשתמש בחיסון BCG lux המוכן למחקרי זיהום.
כדי להתח
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים