דגם עכבר פאוץ' אוויר לקולקציית הפרשה דלקתית הנגרמת על ידי ליפופוליסכריד

הנח עכבר מורדם על כרית הניתוח הסטרילית המחוברת ליחידת נשימה עם זרימה רציפה של חמצן וגז הרדמה.

בעזרת פילטר, טען את המזרק באוויר סטרילי. חבר מחט למזרק והזריק אוויר מעוקר תת עורי לחלק האחורי של העכבר כדי ליצור שקית אוויר בתוך שכבות הרקמה. עקוב אחר העכבר עד להתאוששות.

יש להרדים מחדש את העכבר ולתת ליפופוליסכריד, LPS, לתוך כיס האוויר. LPS נקשר לקולטן דמוי טול 4, TLR-4 על המקרופאגים שוכני הרקמה והתאים הדנדריטים, ומפעיל אותם.

התאים המופעלים משחררים מתווכים דלקתיים שונים כמו ציטוקינים וכימוקינים, המושכים נויטרופילים ותאי חיסון אחרים. מתווכים אלה גם מגבירים את חדירות כלי הדם הסמוכים, ומאפשרים לתאי חיסון ולגורמים מסיסים להיכנס לכיס האוויר מזרם הדם.

כאשר נוזל מצטבר בתוך השקית, הוא יוצר הפרשה המורכבת מתאים דלקתיים ומולקולות ביו-אקטיביות שונות.

המתת חסד של העכבר והזרקת מאגר כביסה מתאים לתוך שקית האוויר. אוספים את ההפרשה הדלקתית לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה וצנטריפוגה. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את התאים במאגר הכביסה.

נתח את ההפרשה הדלקתית כדי לכמת את יחס הנויטרופילים ולקבוע את מידת החדירה שלהם.

לאחר הרדמת העכברים ביום האפס, השתמש בפילטר של 0.22 מיקרון המחובר למזרק של חמישה מיליליטר כדי להשיג נפח של שלושה מיליליטר של אוויר מעוקר. הרם את העור האחורי של העכבר המורדם בעזרת פינצטה והשתמש תת עורית במחט בגודל 26 על 3/8 אינץ' כדי להזריק שלושה מיליליטר של האוויר המעוקר.

לאחר הטיפול, הוציאו את העכברים מיחידת הנשימה והכניסו אותם לכלוב מוגדר היטב. עקוב אחר העכברים כדי לוודא שהם בחיים עד שהם מתחילים לנוע. ביום השלישי, הזרקו שלושה מיליליטר נוספים של אוויר מעוקר לכיס האוויר שהוקם קודם לכן כדי לתמוך בכיס האוויר.

ביום השישי יש להזריק טיפולים שונים לתוך נרתיק האוויר. הזריק מיליליטר אחד של PBS כבקרה שלילית, והזריק מיליליטר אחד של מיקרוגרם אחד למיליליטר LPS כבקרה חיובית כדי לגרום לדלקת מקומית. לאחר שש שעות, הקריבו את העכברים.

עבור כל שקית אוויר, הזרקו מיליליטר אחד של מאגר כביסה כדי לשטוף את שקית האוויר ולאסוף את ההפרשה הדלקתית בצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר. לאחר מכן, שטפו את שקית האוויר עם שני מיליליטר של מאגר כביסה פעמיים, ואספו את ההפרשה הדלקתית באותו צינור צנטריפוגה.

צנטריפוגה בחום של 100 x גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את התאים במיליליטר אחד של מאגר כביסה. ספור את התאים כדי לכמת את יחס הנויטרופילים, באמצעות מנתח ההמטולוגי האוטומטי.