$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
כדי לכמת חדירת תאי חיסון ברקמת שלפוחית השתן של העכבר הנגועה ב-E. coli, הנח את הרקמה הטחונה במאגר עיכול המכיל קולגנאז ודאוקסיריבונוקלאז.
דגירה עם ניעור קבוע כדי לשבש את הרקמה.
קולגנאז מעכל את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה, ומשחרר תאים. דאוקסיריבונוקלאז מפרק DNA חופשי מפריע.
לאחר הדגירה, יש להוסיף בופר עם חומר כלאט וסרום בקר עוברי כדי לנטרל את אנזימי העיכול.
העבירו את התערובת המעוכלת דרך מסננת כדי להסיר פסולת רקמות ורקמת חיבור, וקבלו תרחיף חד-תאי.
צנטריפוגה והשעיית התאים במאגר המכיל נוגדנים חוסמי FC. נוגדנים אלה נקשרים לקולטני Fc של תאי חיסון כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.
הוסף נוגדנים נגד CD45 מתויגים בפלואורופור, הנקשרים לחלבון CD45 הטרנסממברני בתאי החיסון.
צנטריפוגה ולהעביר את התאים המרחפים דרך מסננת תאים כדי להסיר אגרגטים של תאים.
בעזרת ציטומטר זרימה, מדוד את אותות הקרינה מהנוגדנים המצומדים בפלואורופור על תאי החיסון כדי לכמת את חדירת תאי החיסון לשלפוחית השתן.
כדי לבצע זרימה ציטומטרית על רקמת שלפוחית השתן, לאחר בידוד שלפוחית השתן כפי שהודגם, השתמש במספריים כדי לטחון היטב את הרקמה. הוסף שלפוחית טחון אחת לכל צינור המכיל חיץ עיכול, לאחר מכן, נער את הצינור כדי לשטוף את הרקמה הטחונה במאגר העיכול, ושמור אותו על קרח עד שכל שלפוחית השתן מנותחת וטוחנת. דגרו על שלפוחית השתן הטחונה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 60 עד 75 דקות עם ניעור נמרץ ביד למשך 5 שניות כל 15 דקות.
כאשר לרקמה יש מראה זכוכית ושקוף הדומה לנייר טישו רטוב, העיכול הושלם. השבת את אנזימי העיכול על ידי הוספת 2 עד 3 מיליליטר של מאגר ציטומטריה בזרימה קרה כקרח, וערבב בעדינות. לאחר מכן, הניחו את הצינורות על קרח.
כדי להבטיח השעיה של תא בודד ולהסיר כל רקמת חיבור, העבירו את תכולת הצינור דרך מסנן של 100 מיקרומטר המונח בצינור חרוטי של 15 מיליליטר. לאחר מכן, עם קצה בוכנת מזרק, לחץ בעדינות על כל הרקמה שנותרה דרך המסנן. שטפו את המסנן עם 2 מיליליטר נוספים של מאגר ציטומטריית זרימה, ושמרו את הדגימות על קרח. לאחר מכן, שטפו את הדגימות על ידי צנטריפוגה ב -200 פעמים גרם ב -4 מעלות צלזיוס למשך 7 דקות.
השעו מחדש את הגלולה ב-100 מיקרוליטר של מאגר ציטומטריית זרימה המכיל בלוק Fc מדולל ל-5 מיקרוגרם למיליליטר והעבירו לצלחת תחתונה עגולה של 96 בארות. לאחר 10 עד 15 דקות, הוסף 100 מיקרוליטר מקוקטייל הנוגדנים הרצוי לכל דגימה. לאחר מכן, דגרו את הדגימות על קרח, מוגנות מאור, למשך 30 עד 45 דקות. שוטפים את הדגימות על ידי צנטריפוגה ב -200 פעמים גרם ב -4 מעלות צלזיוס למשך 7 דקות.
לבסוף, השעו מחדש את כדורי התא ב-200 מיקרוליטר של מאגר זרימה ציטומטרית, והעבירו את הדגימות דרך מסננת תאים של 40 מיקרומטר על צינור פוליסטירן של 5 מיליליטר ממש לפני הרכישה על ציטומטר זרימה.