כימות חדירת תאי מערכת החיסון ברקמת שלפוחית השתן של עכבר הנגוע בחיידקי E. coli אורופתוגניים באמצעות Flow Cytometry
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:43 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לכמת חדירת תאי חיסון ברקמת שלפוחית השתן של העכבר הנגועה ב-E. coli, הנח את הרקמה הטחונה במאגר עיכול המכיל קולגנאז ודאוקסיריבונוקלאז.
דגירה עם ניעור קבוע כדי לשבש את הרקמה.
קולגנאז מעכל את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה, ומשחרר תאים. דאוקסיריבונוקלאז מפרק DNA חופשי מפריע.
לאחר הדגירה, יש להוסיף בופר עם חומר כלאט וסרום בקר עוברי כדי לנטרל את אנזימי העיכול.
העבירו את התערובת המעוכלת דרך מסננת כדי להסיר פסולת רקמות ורקמת חיבור, וקבלו תרחיף חד-תאי.
צנטריפוגה והשעיית התאים במאגר המכיל נוגדנים חוסמי FC. נוגדנים אלה נקשרים לקולטני Fc של תאי חיסון כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.
הוסף נוגדנים נגד CD45 מתויגים בפלואורופור, הנקשרים לחלבון CD45 הטרנסממברני בתאי החיסון.
צנטריפוגה ולהעביר את התאים המרחפים דרך מסננת תאים כדי להסיר אגרגטים של תאים.
בעזרת ציטומטר זרימה, מדוד את אותות הקרינה מהנוגדנים המצומדים בפלואורופור על תאי החיסון כדי לכמת את חדירת תאי החיסון לשלפוחית השתן.
כדי לבצע זרימה ציטומטרית על רקמת שלפוחית השתן, לאחר בידוד שלפוחית השתן כפי שהודגם, השתמש במספריים כדי לטחון היטב את הרקמה. הוסף שלפוחית טחון אחת לכל צינור המכיל חיץ עיכול, לאחר מכן, נער את הצינור כדי לשטוף את הרקמה הטחונה במאגר העיכול, ושמור אותו על קרח עד שכל שלפוחית השתן מנותחת וטוחנת. דגרו על שלפוחית השתן הטחונה בטמפרט
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים