טכניקה לביסוס מודל זיהום חיידקי בתרבית איברים Ex Vivo
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:52 דק׳ • July 8th, 2025
קחו תרבית איברי שליה אנושית שגדלה על מטריצה חוץ-תאית, או ECM.
התרבית מציגה מבנה דמוי וילי עם סינציטיום חיצוני - שכבת טרופובלסט רב-גרעינית - ומתחת לציטוטרופובלסטים, או CBTs, המתמיינים לטרופובלסטים חוץ-וויליים, או EVTs, המעוגנים לתוך ה-ECM.
הכירו את ליסטריה מונוציטוגנס, חיידק פתוגני.
אינטרנלינים - חלבוני פני השטח של החיידקים - נקשרים לקולטני EVT, מה שמקל על הפנמת חיידקים באמצעות אנדוציטוזיס.
החיידקים המופנמים מפרישים רעלנים יוצרי נקבוביות ופוספוליפאזות המחוררים את קרום הוואקולרי, מתווכים את הקרע שלו ואת בריחת החיידקים לתוך הציטופלזמה.
החיידקים הנמלטים מגייסים מנגנון מארח לפילמור אקטין, ומניעים אותם לעבר קרום התא המארח.
הפרשת גורם אלימות חיידקי גורמת להיווצרות בליטה על קרום המארח. תאים שכנים בולעים את הבליטה המכילה חיידקים, וגורמים להתפשטות זיהום.
החיידקים מתפשטים באמצעות EVTs ל-CBT הבסיסיים.
הוסף אנטיביוטיקה כדי להסיר את החיידקים החוץ-תאיים, והכן את מודל הזיהום לניתוח.
לפני תחילת ההדבקה, יש לחסן מושבה בודדת של L. monocytogenes מצלחת אגר עירוי מוח-לב מפוספסת ב-3 מיליליטר של מרק עירוי מוח-לב. דגרו את התרבית למשך הלילה במצב מלוכסן ב-30 מעלות צלזיוס כדי לאפשר לצמיחת החיידקים להגיע לשלב נייח.
למחרת בבוקר, השתמשו בפינצטה סטרילית כדי להסיר את כל חלקי תרבית האיברים הצפים שלא פלשו לתוך המטריצ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים