אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:49 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה תאים חד-גרעיניים מדם היקפי אנושי, או PBMCs שמקורם בנגיף כשל חיסוני אנושי, או תורם נגוע ב-HIV.
PBMCs מכילים תאים חיסוניים שונים, כולל תאי T חיוביים ל-CD4 נגועים ב-HIV עם DNA פרו-ויראלי משולב.
זרעו את הבארות בתערובת של אריתרוציטים טפילים של פלסמודיום פלציפרום, או PfRBCs - המבטאים אנטיגנים שמקורם בטפילים, ו-RBCs לא נגועים.
במהלך הדגירה, האנטיגנים של ה-PfRBCs מקיימים אינטראקציה עם קולטנים של תאי חיסון, מפעילים אותם ומשחררים ציטוקינים.
ציטוקינים אלה מפעילים איתות במורד הזרם בתאי CD4 T, ומתחילים שעתוק של DNA פרו-ויראלי של HIV וסינתזה של RNA נגיפיים חדשים.
ה-RNA הנגיפי וחלבוני ה-HIV יוצרים חלקיקי וירוס שמתפתחים, מדביקים תאי CD4 T חדשים ומפיצים זיהום ב-HIV.
זיהום מתקדם ב-HIV משבש את הפרשת הציטוקינים, פוגע בתגובה החיסונית נגד PfRBCs ומוביל לזיהום מלריה מתמשך.
עם הזמן, תאי דם אדומים נגועים משחררים טפילים הפולשים ל-RBCs חדשים, מתרבים טפילי מלריה ומבססים את מודל תרבית התאים של הדבקה משותפת של מלריה-HIV.
כדי להגדיר את תרביות ההדבקה המשותפת, התחל בזריעה של 1 x 106 של PBMC חיובי HIV ושלילי HIV מבודד טרי ב-100 מיקרוליטר של RPMI-S+ לבאר לתוך צלחת של 24 בארות. הביאו את הנפח הכולל של כל באר עד 500 מיקרוליטר עם 400 מיקרוליטר RPMI-S+.
לאחר מכן, בשלוש עותקים ובנפח כולל של 500 מיקרוליטר לבאר, הוסיפו 3 x 106 תאי דם אדומים לא נגועים או 3 x 106 תאי דם אדומים טפילים לתאים הנגועים ב- HIV ולא נגועים ב- HIV. הנח את צלחת ההדבקה המשותפת באינקובטור תרבית תאים.
לאחר מכן, לאחר פרק הזמן הניסיוני המתאים, גלולה את התאים ואספה 700 מיקרוליטר של תרבית סופרנטנט מכל באר. צנטריפוגה את הסופרנטנט כדי להסיר כל פסולת. לאחר מכן, ציטט את הדוגמאות לפי הצורך; סמן את הצינורות, והקפיא אותם במינוס 20 מעלות צלזיוס ומטה לניתוח מאוחר יותר.