JoVE Encyclopedia of Experiments
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:33 דק' • July 8th, 2025
קח תרבית אורגנואידים במעי אנושי. האורגנואידים מורכבים מתאי אפיתל הפונים ללומן המרכזי, המחקים ארכיטקטורת in vivo.
קחו מזרק מיקרו המכיל ספורוזואיטים בצורת סהר - הצורה המדבקת - של Cryptosporidium parvum, טפיל.
הזרקת ספורוזואיטים ללומן האורגנואיד.
לקטינים טפילים נקשרים לפחמימות ספציפיות על תאי האפיתל, מה שמקל על כניסתם לווקואול טפילי.
טפיל מופנם הופך לטרופוזואיט - שלב ההזנה - שרוכש חומרים מזינים ועובר רבייה א-מינית ליצירת מרונט מסוג I, המכיל מרוזואיטים - הצורה הפולשנית.
מרוזואיטים משוחררים מדביקים תאי אפיתל שכנים ומפתחים מרונטים מסוג II המכילים מרוזואיטים.
המרוזואיטים נכנסים לתאים שכנים ומתמיינים למיקרוגמונט או מקרוגמונט - שלבי רבייה זכריים ונקביים.
המיקרוגמונט עובר חלוקה ליצירת מיקרוגמטים, המשתחררים מחוץ לוואקואול.
מיקרוגמט מפרה את המרוגמונט ומייצר זיגוטה.
הזיגוטה עוברת חלוקה ויוצרת אוציסט המכיל ספורוזואיט. עם השחרור, הספורוזואיטים חוזרים על מחזור ההדבקה.
קצור את האורגנואידים כדי להעריך את התקדמות הזיהום.
כדי להזריק את הטפילים לצד האפיקלי של אורגנואיד תלת-ממדי, ראשית, השתמשו במושך מיקרופיפטה כדי להכין נימי הזרקת זכוכית. השתמש במלקחיים כדי לחתוך את קצה הנימים לקוטר של 9 עד 12 מיקרומטר, כדי לאפשר זרימה קלה של ספורוזואיטים, או אוציסטים אם אתה בוחר להזריק אוציסטים ישירות, והשתמש בקצות מיקרו-מעמיס כדי למלא כל נימים בתרחיף אוציסט או ספורוזואיט עם תווית צבע ירוק מהיר.
לאחר מכן, טען את הנימים הראשונים הממולאים בספורוזואיט לתוך מיקרו-מזרק, והשתמש במיקרוסקופ הפוך בהגדלה של פי 5 ובלחץ קבוע כדי להזריק 100 עד 200 ננוליטר של התרחיף לכל אורגנואיד.