אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:37 דק׳ • July 8th, 2025
במהלך הזיהום, מקרופאגים מכתשית משחררים מלכודות חוץ-תאיות של מקרופאגים או METs כדי לחסל פתוגנים.
METs מורכבים מסיבי כרומטין מורכבים עם פפטידיל ארגינין דימינאזות, PADs, מטריקס מטאלופרוטאינאזות והיסטונים ציטרולין.
כדי לדמיין METs במקרופאגים מנוזל שטיפת הסימפונות, ראשית, צנטריפוגה את הנוזל.
צלחת את התאים התלויים על תלושי כיסוי בתוך בארות צלחות מרובות בארות.
מקרופאגים נצמדים לכיסויים, בעוד שתאים אחרים נשארים תלויים ונזרקים.
תקן את המקרופאגים, תוך שמירה על המבנה התאי. חדור אותם כדי לגשת למטרות הסלולריות.
הוסף חלבונים חוסמים, ומונעים קשירת נוגדנים לא ספציפיים.
תוסף עם קוקטייל נוגדנים ראשוני שנקשר להיסטונים ציטרולינאז, PADs ומטריקס מטאלופרוטאינאזות, בהתאמה.
הוסף נוגדנים משניים שונים המתויגים בפלואורופור הנקשרים לנוגדנים ראשוניים הקשורים לחלבון MET.
התקן את התאים עם מדיום הרכבה המכיל DAPI. DAPI, צבע פלורסנט, מכתים את סיבי הכרומטין.
באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי, דמיין את ה-METs המאופיינים בסיבי כרומטין חוץ-תאיים פלואורסצנטיים עם היסטונים ציטרולינטים, PADs ומטאלופרוטאינאזות.
לאחר השגת מקרופאגים ריאתיים מבני אדם ועכברים על ידי שטיפת סימפונות, או BAL, על פי פרוטוקול הטקסט, השתמש בטריפן כחול ובהמוציטומטר כדי לבצע ספירת תאים בת קיימא על תמיסת BAL. פיפטה 1 עד 4 x 105 מקרופאגים ב -500 מיקרוליטר של מד
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים