מערכת מדווח וירוסים רקומביננטי במבחנה לזיהוי זיהום ויראלי

קחו תרבית תאים של סרטן הכבד האנושי, מהונדסת גנטית כדי לבטא נתרן טאורוכולט פוליפפטיד או NTCP - קולטן טרנסממברני

.

הוסף נגיף הפטיטיס B רקומביננטי, או HBV. הנגיף מורכב ממעטפת חיצונית המכילה חלבונים על פני השטח ונוקלאוקפסיד פנימי התוחם את הגנום. החדרת גן מדווח לוציפראז מעכבת את יכולת הרבייה של הנגיף.

חלבון מעטפת ויראלית נקשר לקולטן NTCP של התא המארח.

NTCP מקיים אינטראקציה עם קולטן גורם הגדילה האפידרמלי, EGFR, ואוליגומריס, וגורם לאנדוציטוזיס בתיווך EGFR של הנגיף.

המעטפת הנגיפית מתמזגת עם קרום האנדוזום כדי לשחרר את הנוקלאוקפסיד, שמתפרק בקומפלקס הנקבוביות הגרעיניות.

הגנום הנגיפי נכנס לגרעין והופך ל-DNA מעגלי סגור קוולנטי או cccDNA - תבנית יציבה - המקודדת חלבונים נגיפיים, כולל לוציפראז.

במרווחי זמן מוגדרים מראש, קצרו את התאים וליזה כדי לשחרר לוציפראז תוך תאי.

הציגו מצע מדווח. לוציפראז מחמצן את המצע ומייצר אות.

עלייה בפעילות הלוציפראז לאחר ההדבקה מעידה על ביטוי מתמשך של הגנום הנגיפי.

תאי HepG2 צלחת, המבטאים ביציבות נתרן טאורוכולאט, הובלה משותפת של פוליפפטיד או NTCP הרגישים לזיהום HBV, ודוגרים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2.

יום אחד לפני ההדבקה, צלח כ-5 x 10⁴ תאי HepG2/NTCP לבארות של צלחת מצופה קולגן של 96 בארות ב-0.1 מיליליטר של מדיום תרבית. הפשירו HPV רקומביננטי באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס, עד