הדמיה בזמן אמת של מקרופאגים פגוציטוזה של תאי דם אדומים מסוג IgG

0 צפיות4:33 דק' • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קח שקופית ערוץ המכילה מקרופאגים של עכבר. התעלה מתחברת למאגרים מלאים במדיה, ומספקת חומרי הזנה למקרופאגים.

החלף את המדיה בנוגדנים מתויגים פלואורסצנטיים המכילים מדיה, הנקשרים לגליקופרוטאינים ספציפיים על פני השטח, ומסמנים מקרופאגים.

קחו למשל תאי דם אדומים אנושיים, RBCs, עם קרומי תאים עם תווית פלואורסצנטית. אופסוניזציה של תאי דם אדומים עם נוגדני IgG של עכברים, הנקשרים במיוחד לגליקופורין A.

הוסף את ה-RBCs האופסונים של IgG לשקופית המכילה מקרופאגים. קולטני Fc של מקרופאגים קושרים את אזור ה-Fc של IgGs על RBCs, וכתוצאה מכך התקבצו קולטני Fc סביב אזור המגע ומסמנים את ה-RBCs לפגוציטוזיס.

קשירה מפעילה מסלולי איתות תוך תאיים ומפעילה GTPases. GTPases מופעלים מניעים ארגון מחדש של אקטין ופילמור ויוצרים בליטות קרום דקות הנקראות פילופודיה.

יתר על כן, פילופודיה משתרעת סביב ה-RBC, וסוגרת אותו בתוך הכוס הפגוציטית המתפתחת. שולי הספל מתמזגים ויוצרים פגוזום שמפנים את ה-RBC האופסוני לפירוק.

בעזרת מיקרוסקופ קונפוקלי, השג תמונות זמן-lapse של אירועים פגוציטים בודדים.

כדי לתייג את המקרופאגים הצפקיים, החלף את מדיום הביקרבונט בכל שקופית ערוץ במדיום שלם בתוספת HEPES, והטה את השקופית כדי לאפשר להוסיף 100 מיקרוליטר של נוגדן ספציפי למקרופאגים של עכבר מתויג פלואורסצנטי מעניין טיפה לפתח ערוץ 100 מיקרוליטר של השקופית. שאפו את המדיום שזורם למאגר במורד הזרם, ודגרו על התאים למשך 20 דקות בתא לח בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בהיעדר פחמן דו חמצני.

בזמן שתאי הצפק מסומנים, ערבבו בעדינות את 4 עד 2,000 דגימת תאי הדם האדומים, והעבירו 400 מיקרוליטר מהתאים לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה חדש של 2 מיליליטר בבלוק אלומיניום מחומם בתוך מכסה זרימה למינרי למשך כ-5 עד 8 דקות.

כאשר התאים התחממו ל-37 מעלות צלזיוס, ערבבו 0.4 מיקרוליטר של כתם פלזמה פלורסנט אדום מתאים עם התאים, והחזירו את התאים לגוש החום. לאחר 5 דקות יש לשטוף את התאים על ידי הוספת 1.6 מיליליטר מדיום שלם וצנטריפוגה טריים בתוספת HEPES. סובב את הצינור כדי לזהות את כדורית כדוריות הדם האדומות.

בעזרת קצה פיפטה של 1 עד 1.5 מיליליטר, הסר בזהירות את הסופרנטנט בשני נפחים מבלי להפריע לגלולה. לאחר מכן, מערבבים 2,000 מיקרוליטר של מדיום שלם טרי בתוספת HEPES עם התאים. צנטריפוגה והשעיה מחדש של הגלולה ב -400 מיקרוליטר של מדיום. לאחר מכן, סמן את ה-PMS של הצינור עבור כתם קרום פלזמה. בתום 20 דקות הדגירה של תיוג תאים צפקיים, שטפו את השקופית עם 1 מיליליטר של מדיום שלם טרי בתוספת HEPES.

כדי להפוך את כדוריות הדם האדומות, הוסף 1 מיקרוליטר של נוגדן CD235a חד שבטי IgG2b של עכבר לצינור הדגימה של PMS. לאחר 8 דקות ב-37 מעלות צלזיוס עם ערבוב פעם בדקה, העבירו 100 מיקרוליטר של תאי דם אדומים אנושיים מוכתמים בקרום פלזמה, אופסוניים IgG, לשקופית התעלה המכילה מקרופאגים צפק. ברגע שנוספו תאי הדם האדומים האנושיים, הרכיבו את השקופית על מיקרוסקופ קונפוקלי של דיסק מסתובב עם חממת הבמה מכוונת ל-37 מעלות צלזיוס, ומיד התחילו לדמות את התאים.

12:35

שימוש משופרת פלורסצנטיות ירוק חלבון-הבעת Escherichia Coli כדי להעריך את העכבר מקרופאג הצפק Phagocytosis

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:48

במבחנה הדמיה כמותית אסאי עבור פאגוציטוזיס של תאי נוירובלסטומה מתים על ידי iPSC-מקרופאגים

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:10

ויסות תאי גזע מזנכימליים של מקרופאג' פאגוציטוזיס; כמות והדמיה

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:22

מידול פגוציטוזיס מתווך משלים באמצעות תאי דם אדומים אופסוניים במבחנה

סרטונים קשורים

0 צפיות

02:38

Live Imaging of Phagosome Migration in HIV-1-Infected Human Macrophages

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:30

בדיקה לחקר פגוציטוזה מונעת קולטן Fcγ במונוציטים מונושכבות

סרטונים קשורים

0 צפיות

04:13

הדמיה מבוססת מיקרוסקופיה TIRF של היווצרות וסגירת פגוזום

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:06

חקר Phagolysosome Biogenesis בהמקרופאגים בשידור חי

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:22

טכניקת התפוקה Fluorometric גבוהה להערכה של מקרופאג phagocytosis ויקטין פלמור

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:07

"Assay סגירת Phagosome" לדמיין גיבוש Phagosome בשלושה ממדים באמצעות סך פנימית השתקפות מיקרוסקופ פלואורסצנטי (TIRFM)

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 1 אוגוסט 2026