אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:33 דק׳ • July 8th, 2025
קח שקופית ערוץ המכילה מקרופאגים של עכבר. התעלה מתחברת למאגרים מלאים במדיה, ומספקת חומרי הזנה למקרופאגים.
החלף את המדיה בנוגדנים מתויגים פלואורסצנטיים המכילים מדיה, הנקשרים לגליקופרוטאינים ספציפיים על פני השטח, ומסמנים מקרופאגים.
קחו למשל תאי דם אדומים אנושיים, RBCs, עם קרומי תאים עם תווית פלואורסצנטית. אופסוניזציה של תאי דם אדומים עם נוגדני IgG של עכברים, הנקשרים במיוחד לגליקופורין A.
הוסף את ה-RBCs האופסונים של IgG לשקופית המכילה מקרופאגים. קולטני Fc של מקרופאגים קושרים את אזור ה-Fc של IgGs על RBCs, וכתוצאה מכך התקבצו קולטני Fc סביב אזור המגע ומסמנים את ה-RBCs לפגוציטוזיס.
קשירה מפעילה מסלולי איתות תוך תאיים ומפעילה GTPases. GTPases מופעלים מניעים ארגון מחדש של אקטין ופילמור ויוצרים בליטות קרום דקות הנקראות פילופודיה.
יתר על כן, פילופודיה משתרעת סביב ה-RBC, וסוגרת אותו בתוך הכוס הפגוציטית המתפתחת. שולי הספל מתמזגים ויוצרים פגוזום שמפנים את ה-RBC האופסוני לפירוק.
בעזרת מיקרוסקופ קונפוקלי, השג תמונות זמן-lapse של אירועים פגוציטים בודדים.
כדי לתייג את המקרופאגים הצפקיים, החלף את מדיום הביקרבונט בכל שקופית ערוץ במדיום שלם בתוספת HEPES, והטה את השקופית כדי לאפשר להוסיף 100 מיקרוליטר של נוגדן ספציפי למקרופאגים של עכבר מתויג פלואורסצנטי מעניין טיפה לפתח ערוץ 100 מיקרוליטר של השקופית. שאפ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים