אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:53 דק׳ • July 8th, 2025
כדי להתחיל, קח שפופרת המכילה תאים סרטניים במדיה נטולת סרום כדי למזער את הפרעות האסטראז בסרום במהלך הבדיקה. דגירה עם צבע AM סידן שאינו פלואורסצנטי.
אסטרזות תוך-תאיות פעילות הידרוליזה של קלצאין AM לצבע קלצאין פלואורסצנטי אטום לממברנה שנשמר בציטופלזמה.
תאי סרטן מוכתמים בסידן ותאי NK אפקטורים בבארות הבדיקה, בעוד שבארות הבקרה מכילות רק תאי סרטן מוכתמים בסידן ללא תאי NK.
קולטני פני התא המפעילים של תאי NK נקשרים להפעלת ליגנדים על תאי הסרטן, ויוצרים סינפסה חיסונית. קשירה זו מפעילה איתות של תאי NK, ומקטבת את הגרגירים הציטוטוקסיים המכילים פרפורינים וגראנזימים לכיוון הסינפסה לשחרור.
פרפורינים יוצרים נקבוביות בקרום התא הסרטני, מקלים על הכניסה התאית של גראנזימים ויוזמים אפופטוזיס. שלמות הממברנה שנפגעה גורמת לדליפת סידן פלואורסצנטית, ומפחיתה את הקרינה של תאים סרטניים.
צלם תמונות פלואורסצנטיות של הבארות.
ירידה במספר תאי סרטן חיים פלואורסצנטיים בבארות המכילות תאי NK מאשר בארות ביקורת מצביעה על ציטוטוקסיות בתיווך תאי NK כלפי תאים סרטניים.
כדי להעריך ציטוטוקסיות בתיווך תאי NK באמצעות סידן AM, לאחר גידול תאי קו תאי סרטן הכבד האנושי למפגש של 70% עד 80%, כפי שהודגם, השעו מחדש את התאים ב-3 מיליליטר של DMEM ללא סרום, וסמנו את התאים ב-1.5 מיקרוליטר של תמיסת סידן AM של 10 מילי-מולרי למשך 30 דקות בטמפרטורת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים