מדידת נדידת תאי הרג טבעיים בתגובה לגירויים כימוטקטיים

התחל בהוספת חומרים כימיים, כגון כימוקין, בצלחת מרובת בארות.

הנח תא חדיר לטרנסוול בגודל נקבוביות מתאים לבאר. הוסף תרחיף תאי הרג טבעי, או NK, לתא העליון ודגירה.

כמה מולקולות כימוקין מתפזרות דרך הממברנה ונקשרות לקולטני תאי NK. זה מפעיל מסלולי איתות המקדמים שינויים בשלד הציטו, וכתוצאה מכך תנועת תאים כיוונית לעבר ריכוז הכימואטרקטורנט הגבוה יותר בתא התחתון.

לאחר הדגירה, העבירו נפח קבוע של תאים נודדים מהתא התחתון למיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנציה או צינור FACS. הוסף מספר קבוע מראש של חרוזי ספירה פלואורסצנטיים ובצע ספירת תאים מבוססת FACS.

באמצעות הנוסחה הבאה, קבע את המספר המוחלט של תאי NK שהועברו במדגם.

תרשים הנקודות נותן את מספר חרוזי הספירה והתאים המופרדים כאזורים נפרדים, בהתבסס על תכונות הקרינה והפיזור שלהם.

כדי למדוד נדידת תאי NK בתגובה לגירויים כימוטקטיים, אסוף תאי NK אנושיים מתרבית משולבת של 70% עד 80%, והשהה מחדש את התאים בריכוז בינוני של 2.5 x 10⁶ תאים למיליליטר של תרבית תאי NK ללא סרום. לאחר מכן, הוסף 600 מיקרוליטר של מדיום נטול סרום המכיל את חומר המשיכה הכימי של תאי NK המעניין לכל באר.

והניחו תוספת תרבית אחת בקוטר 6.5 מילימטר עם נקבוביות של 5 מיקרומטר לכל באר של מדיום. לאחר מכן, הוסיפו 100 מיקרוליטר של תאי NK לתא העליון של כל תוספת, והניחו את הצלחת בחממת תרבית התאים למשך ארבע שעות.

בתום הדגירה, העבירו את כל נפח התאים הנודדים שאינם נדבקים מתחתית כל באר לצינורות FACS בודדים של 5 מיליליטר, והוסיפו 15 מיקרוליטר של מספר קבוע מראש של חרוזי ספירת זרימה לכל צינור. לאחר מכן, באמצעות ציטומטר זרימה, הערך כל דגימת תא על פי פרוטוקולי ניתוח ציטומטרי זרימה סטנדרטיים, וחשב את המספר המוחלט של תאי NK שהועברו באמצעות הנוסחה.