בדיקה חיידקית בסרום לפעילות חיידקית בתיווך משלים של נוגדנים

קח דגימת סרום מדוללת סדרתית המכילה נוגדנים חד שבטיים נגד ליפופוליסכרידים, או LPS - מרכיב ממברנה חיצונית של חיידקים גרם שליליים.

הכניסו חיידקים גרם שליליים. נוגדנים בסרום נקשרים ל-LPS חיידקים.

הוסף חלבונים משלימים. קומפלקס C1 נקשר לנוגדנים הקשורים ל-LPS, ויוצר C1 פעיל אנזימטית.

C1 מופעל מבקע את C4 ו-C2 ליצירת C3 convertase, אשר מבקע את C3 ליצירת C5 convertase. ההמרה מבקעת את C5 כדי לייצר C5b, המגייס C6 ו-C7. הקומפלקס שנוצר נכנס לתוך הממברנה החיצונית ומתחבר ל-C8 ול-C9 מרובה, ויוצר נקבובית.

נזק לקרום החיצוני מערער את יציבות הממברנה הפנימית, וגורם לליזה של תאים.

מניחים את התערובת על צלחת אגר ומורחים. דגירה לגידול חיידקים. כסו את הצלחת באגר המכיל טריפניל טטרזוליום כלוריד, או TTC, אשר מצטמצם על ידי דהידרוגנאזות מיקרוביאליות, ומעניק צבע אדום למושבות חיידקים.

מספר המושבה עולה עם דילול הדגימה, מה שמעיד על פעילות חיידקית מופחתת עם ריכוז נוגדנים נמוך יותר.

כדי להתחיל, דגרו את הדגימות באמבט מים חמים בטמפרטורה של 56 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות כדי להשבית את דגימות הבדיקה. השג לוחית בדיקה ו-20 מיקרוליטר של מאגר בדיקה לעמודות 1 עד 12 של שורות A עד G. הוסף 20 מיקרוליטר של מאגר בדיקה לעמודות 1 ו-2 של שורה H. טען 30 מיקרוליטר מכל דגימת בדיקה בשכפול לשורה H של לוחית הבדיקה.

כדי להתחיל לבצע דילול סדרתי