אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:36 דק׳ • July 8th, 2025
אפרוציטוזיס הוא התהליך שבו תאים פגוציטים מנקים תאים אפופטוטיים.
כדי לנתח אפרוציטוזיס, השג תימוציטים עכברים רגישים לאפופטוזיס. דגירה עם צבע CFSE חדיר לתאים.
אסטרזות תוך-תאיות מבקעות את CFSE לצבע פלואורסצנטי אטום לתאים, ומכתימות תימוציטים. יש להוסיף סרום מנוטרל בחום כדי למנוע כתמים עודפים.
צלחת את התימוציטים המוכתמים על צלחת תרבות. הוסף סטאורוספורין, מעכב חלבון קינאז, המשבש את מפל האיתות התאי הקריטי, וגורם לאפופטוזיס. יתר על כן, שאריות פוספטידילסרין עוברות לעלון החיצוני של קרום התא, ומתפקדות כ"אותות אכול אותי".
הוסף ריכוזי תימוציטים אפופטוטיים הולכים וגדלים לבארות צלחות מרובות בארות המכילות מקרופאגים צפקיים של עכברים פעילים, המבטאים קולטן ספציפי טירוזין קינאזות.
קינאזות אלו קושרות את הפוספטידילסרין החשוף על תימוציטים אפופטוטיים, מה שמקל על הפנמתם על ידי מקרופאגים.
לאחר הדגירה, הסר תימוציטים אפופטוטיים צפים חופשיים. הוסף נוגדנים נגד CD11b מתויגים פלואורופור, הנקשרים למולקולות CD11b של מקרופאגים.
בעזרת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, התבונן בתימוציטים אפופטוטיים פלואורסצנטיים בתוך מקרופאגים פלואורסצנטיים שונים, המעידים על אפרוציטוזיס.
בארות עם ריכוזי תימוציטים אפופטוטיים גבוהים יותר מציגות תימוציטים מופנמים מוגברים.
כדי לקצור תימוציטים לאחר פתיחת חלל החזה של עכבר C57/Black-6 נאיבי, השתמש במלקחי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים