גירוי חוץ גופי והדמיה של מלכודות חוץ-תאיות של מקרופאגים

התחל עם תרבית מקרופאגים דבקה.

הוסף ציטוקינים מעודדי דלקת.

הציטוקין נקשר לקולטני פני השטח של המקרופאגים, ומתחיל סדרה של אירועים דלקתיים.

ראשית, איתות הציטוקינים מעורר ייצור של פפטידים אנטי-מיקרוביאליים.

במקביל, הכרומטין בתוך גרעין המקרופאגים עובר עיבוי.

תהליך זה, יחד עם שינויים בהרכב הממברנה, משבש את הממברנה הגרעינית, ומשחרר כרומטין מפורק לציטופלזמה.

בציטופלזמה, הפפטיד האנטי-מיקרוביאלי מקיים אינטראקציה עם הכרומטין המשוחרר.

חדירת קרום התא בתיווך איתות ציטוקינים גורמת לשחרור הכרומטין המעובה לחלל החוץ-תאי, ויוצר מלכודת חוץ-תאית של מקרופאגים, או MET.

מבנים דמויי רשת אלה מורכבים מ-DNA, היסטונים, מולקולות אנטי-מיקרוביאליות ואנזימים.

הוסף SYTOX green, צבע חומצת גרעין פלואורסצנטי הנקשר באופן סלקטיבי ל-DNA החשוף במלכודות החוץ-תאיות.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, ה-MET מופיע כפסים ירוקים של DNA חוץ-תאי המשתחררים מהמקרופאג המגורה.

בתנאים סטריליים, הכינו את אמצעי התרבות המכילים ממריצים שונים של שחרור MET למדיה המלאה RPMI 1640. לניסויים עם גירוי חומצה היפוכלורוסית, הכינו 200 חומצה היפוכלורית מיקרו-מולרית בצינור פלקון עם HBSS שחומם מראש ל-37 מעלות צלזיוס.

לאחר טיפול הקיטוב, שאפו את המדיה התאית מכל באר, ושטפו בזהירות את התאים שלוש פעמים עם 1 מיליליטר של PBS סטרילי לגירוי PMA, TNF-alpha ואינטרלוקין-8,