בדיקת ציטוטוקסיות של זני סטפילוקוקוס זהוב על נויטרופילים בעקבות פגוציטוזה

קח זני Staphylococcus aureus אלימים ופחות אלימים.

הוסף סרום כדי להקל על החיידקים.

העבר ריכוזי חיידקים הולכים וגדלים לבארות צלחות מרובות בארות מצוננות המכילות נויטרופילים. טמפרטורות נמוכות מונעות הפעלת נויטרופילים.

צנטריפוגה כדי להקל על פגוציטוזיס מסונכרנת.

קולטני נויטרופילים קושרים את האופסונינים, ומפעילים הפנמת חיידקים לפאגוזומים.

בחיידקים אלימים, הסביבה הפגוזומלית מעוררת ביטוי של רעלים ציטוליטיים.

רעלנים אלה יוצרים נקבוביות, משבשים את הפגוזומים ומסכנים את שלמות קרום הנויטרופילים.

עם זאת, החיידקים הפחות אלימים מציגים ביטוי רעלן ציטוליטי מופחת.

לאחר הדגירה, נתק את הנויטרופילים והעביר אותם לצינורות ציטומטר זרימה המכילים צבע פלואורסצנטי פרופידיום יודיד (PI).

הצבע נכנס לנויטרופילים עם ממברנות שנפגעו ומכתים את ה-DNA.

בעזרת ציטומטר זרימה, נתח את הנויטרופילים לצביעה PI.

עלייה תלוית ריכוז בשיעור הנויטרופילים החיוביים ל-PI בעקבות פגוציטוזיס של הזן האלים, בהשוואה לזן הפחות אלים, מצביעה על הציטוטוקסיות של הזן האלים כנגד נויטרופילים.

כאשר Staph aureus בתרבית הגיע לצמיחה מעריכית אמצעית, העבירו 1 מיליליטר של חיידקים מתורבתים לצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר, וצנטריפוגה ב-5000 גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. שטפו את S. aureus על ידי שאיבת סופרנטנט מבלי להפריע לגלולה, והשעו מחדש את החיידקים