אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:26 דק׳ • July 8th, 2025
לחשוף עכבר לטיפות אירוסול המכילות Mycobacterium tuberculosis.
חיידקים מגיעים ללומן של נאדיות - שקי האוויר הזעירים בתוך הריאות - המכילים מקרופאגים.
קולטנים לזיהוי דפוסי מקרופאגים נקשרים לדפוסים המולקולריים הקשורים לפתוגן על החיידקים, ומפעילים את בליעתם לפגוזום.
חיידקים נבלעים מפרישים חלבונים מיוחדים, הקורעים את קרום הפגוזום. החיידקים בורחים לתוך הציטופלזמה ומתרבים.
לאחר ההדבקה, הרדמו את העכבר. מתן תוך-צפקי של מצע מדווח של האנזים β-לקטמאז החיידקי לצורך פלואורסצנציה של אנזים מדווח או הדמיית REF.
המצע מגיע לנאדיות הריאה דרך מחזור הדם ונכנס לתאים הנגועים.
הוא חודר לקרום החיצוני של החיידקים כדי להגיע לחלל הפריפלזמי המכיל β-לקטמאז.
המצע מכיל טבעת β-לקטם המחברת בין פלואורוכרום למרווה. בשל הקרבה, הקרינה של הפלואורוכרום נספגת על ידי המרווה.
β-לקטמאז מבצע הידרוליזה של טבעת β-לקטם, משחרר את הפלואורופור וכתוצאה מכך פליטת פלואורסצנטיות.
דמיין את הקרינה כדי להעריך זיהום מיקובקטריאלי.
כדי להמשיך, העמיסו בעלי חיים במשקל ידוע לתוך תא החיסון המופעל. החדר יכול להכיל עד 90 עכברים. לאחר מכן, סגור את כל התפסים בדלת. לאחר מכן, חבר את הנבולייזר באמצעות מהדק פלדה. לאחר מכן, לחץ על כפתור ההתחלה בתא, והגדר את קצב זרימת האוויר בין 3 ל-5 ליטר לדקה.
האוויר הדחוס יזרום במהירות של כ-22 עד 26 פאונד לאינץ' מרובע, וחשוב מכך, אמור להיות אפשרי לראות את ערפל החיסון בתא. לאחר 15 דקות תופיע נורה אדומה בחזית לוח הבקרה, ואות קולי יציין את סיום הריצה. לאחר מכן, לחץ על לחצן האיפוס כדי לאפס את הטיימרים. כדי לשחרר את הוואקום, לחץ על הכפתור האדום הקטן בדלת החדר.
לאחר מכן, פתחו את דלת החדר והחזירו את העכברים לכלובי הבית שלהם. בהמשך, החזיקו את החיות בחדר ההכלה. לאחר מכן, החזירו את הצנצנת במיכל ההובלה לארון הבטיחות הביולוגית. שם, השליכו את תרחיף החיידקים שנותר למיכל פסולת ייעודי. לאחר מכן, הניחו את צנצנת הנבולייזר המשומשת בתוך שקית ביולוגית ואטמו את השקית להובלה לחיטוי.
כדי לנקות את החדר, יש לרסס את המשטחים הפנימיים בפנול חוצץ ואתנול 70%. אפשר לתמיסות אלה להגיב על משטחים אלה למשך 10 דקות, ולאחר מכן נגב אותם ביסודיות. השלך את כל המגבונים לאשפה הביולוגית. לאחר מכן, חיטוי האשפה, מיכל הפסולת וצנצנות נבולייזר משומשות.
העבירו את בעלי החיים לחדר ההדמיה. שם, יש להרדים בעל חיים על פי פרוטוקול הטקסט ולהזריק לו מצע ניגוד על ידי הזרקה תוך צפקית. בתוכנת מערכת ההדמיה, אתחל את המערכת והמשך כאשר סרגל הטמפרטורה הופך לירוק. לאחר אתחול המערכת, הנח את העכבר בתא ההדמיה.
ודא שהנחיריים שלו נמצאים בתוך חרוט האף כך שהוא יקבל חומר הרדמה במהלך ההדמיה. כעת, חזור למחשב. בלוח בקרת הרכישה, בחר פלואורסצנטי, טרנס-אור, להדמיה של בעלי חיים שלמים, או אפי-תאורה לצפייה ברקמות ריאה. עבור עכבר בודד, הגדר את שדה הראייה ל-B ואת מפלס המנורה לגבוה.
עבור החשיפה, השתמש בזמן אוטומטי, בשילוב בינוני ובשניים או שלושה עבור F/Stop. לאחר מכן, הגדר את מסנן העירור ל-745 ננומטר ואת מסנני הפליטה מ-780 עד 840 ננומטר. לאחר מכן, עבור להגדרת הרצף ובחר 9 עד 12 נקודות תמרון באזור העניין. כעת, לחץ על כפתור הרכישה כדי לאסוף תמונות.