אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:26 דק׳ • July 8th, 2025
לחשוף עכבר לטיפות אירוסול המכילות Mycobacterium tuberculosis.
חיידקים מגיעים ללומן של נאדיות - שקי האוויר הזעירים בתוך הריאות - המכילים מקרופאגים.
קולטנים לזיהוי דפוסי מקרופאגים נקשרים לדפוסים המולקולריים הקשורים לפתוגן על החיידקים, ומפעילים את בליעתם לפגוזום.
חיידקים נבלעים מפרישים חלבונים מיוחדים, הקורעים את קרום הפגוזום. החיידקים בורחים לתוך הציטופלזמה ומתרבים.
לאחר ההדבקה, הרדמו את העכבר. מתן תוך-צפקי של מצע מדווח של האנזים β-לקטמאז החיידקי לצורך פלואורסצנציה של אנזים מדווח או הדמיית REF.
המצע מגיע לנאדיות הריאה דרך מחזור הדם ונכנס לתאים הנגועים.
הוא חודר לקרום החיצוני של החיידקים כדי להגיע לחלל הפריפלזמי המכיל β-לקטמאז.
המצע מכיל טבעת β-לקטם המחברת בין פלואורוכרום למרווה. בשל הקרבה, הקרינה של הפלואורוכרום נספגת על ידי המרווה.
β-לקטמאז מבצע הידרוליזה של טבעת β-לקטם, משחרר את הפלואורופור וכתוצאה מכך פליטת פלואורסצנטיות.
דמיין את הקרינה כדי להעריך זיהום מיקובקטריאלי.
כדי להמשיך, העמיסו בעלי חיים במשקל ידוע לתוך תא החיסון המופעל. החדר יכול להכיל עד 90 עכברים. לאחר מכן, סגור את כל התפסים בדלת. לאחר מכן, חבר את הנבולייזר באמצעות מהדק פלדה. לאחר מכן, לחץ על כפתור ההתחלה בתא, והגדר את קצב זרימת האוויר בין 3 ל-5 ליטר לדקה.
האוויר הדחוס יזרום במהירות של כ-22 עד 26 פאונד לאינץ' מרובע, וח
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים