הערכת אלימות הלישמניה בתוך מקרופאגים מתורבתים

התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה מקרופאגים שמקורם במח עצם על כיסויים.

טפלו במקרופאגים עם Leishmania promastigotes - השלב הזיהומי של הטפיל.

במהלך הדגירה, הטפילים מקיימים אינטראקציה עם מקרופאגים, מה שמקל על הרכבת F-actin סביב אתר האינטראקציה.

מקרופאגים בולעים את הטפילים בפאגוזומים המוקפים ב-F-actin, ויוצרים ואקואולים טפיליים או PVs - נישה שכפולה.

בתוך PVs, טפילים משחררים גורמי הישרדות, מגבירים את הצטברות ה-F-actin סביב הוואקואולים ומעכבים את היזוגם עם ליזוזומים.

בנוסף, טפילים מווסתים את ייצור הפסידין - הורמון פפטיד מקרופאגים, מעכב שחרור ברזל ומעלה את רמות הברזל התוך תאי.

זרם הברזל לוואקואולים מקדם התמיינות פרומסטיגוטים לאמסטיגוטים פתוגניים ומקל על הכפלתם, ומגביר את האלימות.

לאחר הדגירה, יש לשטוף כדי להסיר טפילים חופשיים, ולאחר מכן, לתקן ולחלחל את המקרופאגים הנגועים.

הכנס צבע פלואורסצנטי של חומצת גרעין כדי לצבוע את הגרעינים של מקרופאגים ואמסטיגוטים נגועים.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, גרעינים קטנים מקובצים סביב הגרעין הגדול של המקרופאג מאשרים את נוכחותם של טפילים תוך-תאיים, ומדגימים את האלימות של הלישמניה.

ביום השביעי או השמיני לאחר התרבית, השתמש בקצה שאיפה המותאם לקו ואקום כדי להעביר ארבעה כיסויי זכוכית 12 מילימטר מעוקרים בחיטוי לתחתית כל באר של צלחת תרבית בת שש בארות ללא חפיפה. הכינו צ