הקמת מודל זיהום באמצעות מיקרו-הזרקה של אורגנואידים בקיבה עם חיידקים פתוגניים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:30 דק׳ • July 8th, 2025
תחת סטריאומיקרוסקופ, התבונן באורגנואידים בקיבה, מבנים תאיים תלת מימדיים המורכבים מתאי קיבה מובחנים ותאי גזע.
הכניסו מיקרו-מזרק עמוס בהליקובקטר פילורי, פתוגן קיבה.
הכנס את המחט לאורגנואיד המטרה והזריק את תרחיף החיידקים.
התבונן בתמיסה עכורה המתפתחת בתוך הלומן.
הליקובקטר פילורי משתמש בחלבון דבק ספציפי על פני השטח שלו כדי להיקשר לקולטן תאי הקיבה, ויוצר אינטראקציה יציבה בין החיידקים לתאי המארח.
אינטראקציה זו מעוררת את התארכות פילוס הפרשת החיידקים, מבנה גדול בצורת מנהרה המשתרע לכיוון קרום התא המארח.
הליקובקטר פילורי משתמש בפילוס ההפרשה כדי להזריק גורמי אלימות, כולל גן A או CagA הקשור לציטוטוקסיות לתא המארח.
ברגע שנכנס לתא, CagA עובר זרחון על ידי קינאז התא המארח.
CagA זרחני מבטל את הוויסות של מפלי איתות תוך-תאיים מרובים המשנים את תפקודי התא המארח, ומקדם טרנספורמציה סרטנית.
אסוף את האורגנואידים הנגועים להמשך ניתוח.
כדי להתחיל בהזרקה מיקרו של אורגנואידים, קצרו את חיידקי הליקובקטר פילורי ושטפו אותם במדיום בסיסי על פי הפרוטוקולים הסטנדרטיים. לאחר מדידות צפיפות אופטיות לקביעת מספר החיידקים, יש לדלל את התרבית ל-1 x 109 חיידקים למיליליטר בתווך בסיסי.
משוך את נימי הזכוכית לשתי מחטי הזרקה באמצעות מושך מיקרופיפטה, ואחסן בצלחת פטרי נקייה. לאחר מכן, בעזרת מלקחיים, שוברים את קצה מחט ההזרקה האחת כדי לי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים