אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:13 דק׳ • July 8th, 2025
קחו צלחת מרובת בארות המכילה תאי אפיתל דבוקים וטפלו בה במוטציות קוקסיאלה ירוקות עם חלבון פלואורסצנטי; חלקן עם מוטציות בגן מערכת ההפרשה מסוג IV, או גן T4SS - חיוניות לשכפול.
מוטציות משוכפלות מקיימות אינטראקציה עם תאי אפיתל, מעוררות בליעת קוקסיאלה, יוצרות ואקואול המכיל קוקסיאלה, או CCV, ומגייסות גליקופרוטאין ממברנה הקשור לליזוזום-1, או LAMP1 ל-CCV.
זה מקל על הפרשת חלבוני אפקטור לציטופלזמה של התא דרך מערכת ההפרשה מסוג IV, ומקדם שכפול חיידקים.
מוטציות עם מוטציות בגן T4SS נותרות ללא שכפול.
לאחר הדגירה, צבעו את התאים בצבע פלואורסצנטי, קבעו אותם וחודרו את קרום התא.
הציגו נוגדנים ראשוניים ספציפיים ל-LAMP1 המקיימים אינטראקציה עם חלבוני LAMP1 ב-CCV.
על גבי נוגדנים משניים המסומנים באדום-פלואורופור, המקיימים אינטראקציה עם נוגדנים ראשוניים, בעוד שצבע הוכסט מכתים את גרעיני התאים.
תחת מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי, ואקואולים פלואורסצנטיים אדומים המכילים פחות קוקסיאלה ירוקה ליד הגרעין מצביעים על שכפול פגום של מוטציות קוקסיאלה.
עם זאת, ואקואולים המכילים קוקסיאלה ירוקה רבים בתוך התאים מצביעים על צמיחה תוך-תאית מוצלחת של מוטציות קוקסיאלה משוכפלות.
לאחר הכנת תרחיף תאי Vero של 105 תאים למיליליטר במדיום RPMI על פי פרוטוקול הטקסט, יש להוציא 100 מיקרוליטר מהמתלה בכל באר של צלחת שחורה בת 96 בארות עם תחתית שקופה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים