בדיקת זיהום חיידקי לחקר אינטראקציות אנאירוביות בין חיידקים לתאים מארחים

התחל בתרבית של תאי אנדותל.

החלף את המדיה במדיה אנאירובית. דגירה בתא אנאירובי לאיזון טמפרטורה.

הוסיפו את Porphyromonas gingivalis, חיידק אנאירובי פתוגני, ודגרו לזמן קצר.

לחיידקים יש בליטות חלבון, הידועות בשם פימבריה, הנקשרות למולקולות הידבקות ספציפיות על תאי האנדותל, מה שמקל על היצמדות החיידקים.

קשירה זו מפעילה מפלי איתות תוך-תאיים, וכתוצאה מכך סידור מחדש של שלד הציטו של אקטין והפנמת חיידקים לפאגוזומים.

לאחר הדגירה, הסר מדיה. שטפו עם מאגר אנאירובי כדי להסיר חיידקים חוץ-תאיים שאינם נדבקים.

הוסף חומר ניקוי עדין כדי לחלחל את קרומי התאים המארחים ולגרום לליזה של תאים, לשחרר חיידקים מופנמים ומחוברים לפני השטח מבלי לגרום נזק.

מדללים את החיידקים המכילים ליזאט במדיה ומכינים דילולים סדרתיים.

צלחת את הדילולים הללו על צלחות אגר דם. דגירה בתנאים אנאירוביים כדי לאפשר ל-Porphyromonas gingivalis להתרבות וליצור מושבות.

לאחר הדגירה, ספור את היחידות היוצרות מושבה (CFUs) על כל צלחת כדי לכמת חיידקים המחוברים לפני השטח ומופנמים, מה שמעיד על אינטראקציות בין חיידקים לתאים מארחים.

לצורך תרבית וניסויים עם Porphyromonas gingivalis, נשמר תא אנאירובי ויניל עם אווירה מלאכותית המכילה 80% חנקן, 10% מימן ו -10% פחמן דו חמצני.

הנח 30 צלחות אגר דם, 500 מיליליטר PBS ומיליליטר של גורם גדילה אנדותל כלי דם, או מדיום VEGF