הדמיה של חיידקים אנאירוביים מופנמים בתוך תאי אנדותל מארחים

0 צפיות4:19 דק' • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התחל בתרחיף של Porphyromonas gingivalis, חיידקים פתוגניים אנאירוביים.

הוסף BCECF-AM, צבע שאינו פלואורסצנטי וחדיר לתאים.

אסטרזות ציטופלזמיות אקטיביות מספקות הידרוליזה של הצבע לצורה פלואורסצנטית, אטומה לתאים, ומכתימות את החיידקים.

צנטריפוגה. השעו מחדש את החיידקים במדיה אנאירובית.

הוסף את החיידקים המסומנים לבארות צלחות מרובות בארות המכילות תלושי כיסוי עם תאי אנדותל אנושיים דבוקים.

דגירה בתא אנאירובי.

הפימבריה החיידקית נקשרת לקולטני פני השטח של תאי האנדותל, ויוזמת מפלי איתות תוך-תאיים.

זה מוביל לסידור מחדש של אקטין ולהפנמת חיידקים בתוך פגוזומים.

לאחר הדגירה, שטפו את הכיסויים עם חיץ כדי להסיר חיידקים לא מופנמים.

תקן את התאים עם פרפורמלדהיד כדי לשמר את המבנים התאיים. לחדור לתאים עם חומר ניקוי לא יוני כדי לגשת למטרות תוך-תאיות.

הוסף פלואידין עם תווית פלואורסצנטית, שנקשר לחוטי האקטין.

הנח את הכיסוי מעל אמצעי הרכבה המכיל DAPI, שמכתים את ה-DNA.

התבונן ב- Porphyromonas gingivalis הפלואורסצנטי בתוך תאי אנדותל עם אקטין פלואורסצנטי, המאשר הפנמת חיידקים.

כדי לדמיין חיידקים מופנמים, ראשית, העבירו אספטית כיסויי זכוכית אוטוקלאב בתוך כל באר של צלחת בת 12 בארות. צלחת חמש פעמים 10 לארבעת ה-HUVECs לכל באר על הכיסוי, ודגירה למשך 24 שעות. לתייג חיידקים, חיידקי צנטריפוגה בשלב אמצע העץ, ולהשעות את הגלולה עם PBS אנאירובי. שוב צנטריפוגה, וחזור על שלב הכביסה.

הוסף 20 מיקרוליטר של 0.2 מילי-מולרי BCECF-AM לשני מיליליטר של PBS אנאירובי המכיל חמש עד שבע פעמים 10 עד השמיני חיידקים למיליליטר. דגירה בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות בחושך.

הצבע הפלואורסצנטי שבו אנו משתמשים יכול להכתים את רוב החיידקים האנאירוביים. לפיכך, אין צורך בריאגנטים אחרים, כגון נוגדן ספציפי.

צנטריפוגה את תרחיף החיידקים ב-5,000 פעמים גרם למשך 10 דקות כדי להסיר את מגיב התיוג הלא קשור, ולהשעות מחדש את החיידקים במדיום VEGF. לאחר מכן, הדביקו את תאי HUVEC ביחס של 100 ל-1, חיידקים לתאים, ודגרו ב-37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. לאחר הדגירה, הסר את מדיום הזיהום ושטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS. לאחר מכן, הוסיפו 4% פרפורמלדהיד, ודגרו בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות כדי לתקן את התאים בתא האנאירובי.

הסר את התאים הקבועים מהתא ולאחר מכן, שטוף את הכיסויים עם PBS שלוש פעמים. דגרו את הכיסויים במיליליטר אחד של 0.2% Triton X-100 למשך 10 דקות כדי לחלחל לתאים. לאחר מכן, שטפו את הכיסויים עם PBS שלוש פעמים. כעת, הוסיפו 50 מיקרוליטר של 50 מיקרוגרם למיליליטר של TRITC פלואידין לכל כיסוי, ודגרו במשך 45 דקות בטמפרטורת החדר כדי להכתים אקטין אוליגומרי תאי.

לאחר הדגירה יש לשטוף את הכיסוי עם PBS שלוש פעמים. הפוך את הכיסוי על מגלשת זכוכית עם מדיום הרכבה רך המכיל מיקרוגרם אחד למיליליטר DAPI לצביעה גרעינית. לאחר מכן, אטמו את היקף הכיסוי עם לק, והתבוננו במיקרוסקופיה קונפוקלית.

09:18

הערכת פלישת חיידקים לתאי לב בתרבות וקולוניזציה של הלב בעכברים נגועים באמצעות מונוציטוגנים ליסטריה

סרטונים קשורים

0 צפיות

07:20

Monolayers Colonoid האדם ללמוד אינטראקציות בין גורמי מחלה, Commensals אפיתל המעי מארח

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:41

חקירת הפאגוציטוזה של לישמניה באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית

סרטונים קשורים

0 צפיות

12:58

Visualisation וכימות של אינטראקציות תאיים של Neisseria meningitidis ואת האדם α-actinin על ידי הדמיה confocal

סרטונים קשורים

0 צפיות

02:58

הדמיה בתיווך ננו-חלקיקים של שיפוץ אנדו-ליזוזומלי בתאים נגועים בחיידקים

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:10

Micro-Parallel Plate Flow Chamber Model for Studying Bacterial Adhesion to Human Endothelial Cells

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:50

An In Vivo Model to Study Shear-Dependent Bacterial Adhesion

סרטונים קשורים

0 צפיות

05:28

בדיקת זיהום חיידקי לחקר אינטראקציות אנאירוביות בין חיידקים לתאים מארחים

סרטונים קשורים

0 צפיות

02:37

הערכת Porphyromonas gingivalis מופנמת בתאי אנדותל מארחים

סרטונים קשורים

0 צפיות

11:40

אנושי עכבר מודל ללמוד זיהומים חיידקיים מיקוד microvasculature

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 1 אוגוסט 2026