הדמיה של חיידקים אנאירוביים מופנמים בתוך תאי אנדותל מארחים

התחל בתרחיף של Porphyromonas gingivalis, חיידקים פתוגניים אנאירוביים.

הוסף BCECF-AM, צבע שאינו פלואורסצנטי וחדיר לתאים.

אסטרזות ציטופלזמיות אקטיביות מספקות הידרוליזה של הצבע לצורה פלואורסצנטית, אטומה לתאים, ומכתימות את החיידקים.

צנטריפוגה. השעו מחדש את החיידקים במדיה אנאירובית.

הוסף את החיידקים המסומנים לבארות צלחות מרובות בארות המכילות תלושי כיסוי עם תאי אנדותל אנושיים דבוקים.

דגירה בתא אנאירובי.

הפימבריה החיידקית נקשרת לקולטני פני השטח של תאי האנדותל, ויוזמת מפלי איתות תוך-תאיים.

זה מוביל לסידור מחדש של אקטין ולהפנמת חיידקים בתוך פגוזומים.

לאחר הדגירה, שטפו את הכיסויים עם חיץ כדי להסיר חיידקים לא מופנמים.

תקן את התאים עם פרפורמלדהיד כדי לשמר את המבנים התאיים. לחדור לתאים עם חומר ניקוי לא יוני כדי לגשת למטרות תוך-תאיות.

הוסף פלואידין עם תווית פלואורסצנטית, שנקשר לחוטי האקטין.

הנח את הכיסוי מעל אמצעי הרכבה המכיל DAPI, שמכתים את ה-DNA.

התבונן ב- Porphyromonas gingivalis הפלואורסצנטי בתוך תאי אנדותל עם אקטין פלואורסצנטי, המאשר הפנמת חיידקים.

כדי לדמיין חיידקים מופנמים, ראשית, העבירו אספטית כיסויי זכוכית אוטוקלאב בתוך כל באר של צלחת בת 12 בארות. צלחת חמש פעמים 10 לארבעת ה-HUVECs לכל באר על הכיסוי, ודגירה למשך 24 שעות. לתייג חיידקים, חיידקי צנטריפוגה בשלב אמצע העץ, ולהשעות את הגלולה עם