הערכת Porphyromonas gingivalis מופנמת בתאי אנדותל מארחים

במהלך זיהום Porphyromonas gingivalis, הפימבריה על החיידקים האנאירוביים נקשרים לקולטנים ספציפיים בתאי המארח.

קשירה זו יוזמת מפלי איתות תוך תאיים, וכתוצאה מכך סידור מחדש של אקטין והפנמת חיידקים בתוך פגוזומים.

כדי להעריך את ההישרדות של Porphyromonas gingivalis מופנם בתוך תאי אנדותל במבחנה, קח צלחת מרובת בארות המכילה תאי אנדותל המודבקים לכיסויים.

הוסף תרחיף Porphyromonas gingivalis. דגירה כדי להקל על הפנמת חיידקים.

יש להסיר את המדיה ולשטוף באמצעות חוצץ אנאירובי להסרת חיידקים שאינם מופנמים.

הוסף מדיה המכילה אנטיביוטיקה, אטומה לתאי האנדותל, כדי לחסל את החיידקים המחוברים לפני השטח.

דגירה עם חומר פעילי שטח עדין כדי ליז את תאי האנדותל, ולשחרר את החיידקים מבלי לגרום לליזה שלהם.

מדללים את הליזט שנאסף במדיה. הכן דילולים סדרתיים של הליזאט.

צלחת את הדילולים על צלחות אגר דם. דגירה בתנאים אנאירוביים כדי ש-Porphyromonas gingivalis יגדל וייצור מושבות גלויות.

ספרו את המושבות כדי להעריך את היכולת של Porphyromonas gingivalis לפלוש ולשרוד בתוך תאי אנדותל.

לאחר זיהום של תאי HUVEC יש לשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS אנאירובי. לאחר מכן, הוסף 2 מיליליטר של מדיום VEGF בתוספת ריכוזים אופטימליים מראש של אנטיביוטיקה לתאי HUVEC. דגרו על התאים למשך שעה. שאפו את המדיום, והוסיפו 2 מיליליטר של תמיסת ספונין 1% ב-BHI לכל באר. דגירה למשך 15 דקות.

לאחר מכן, מגרדים את התאים הליזים, ואוספים את הליזאט בצינור צנטריפוגה. מדללים את הליזאט 1 עד 1 במדיום BHI, ולאחר מכן מכינים דילולים סדרתיים החל מ-1 עד 100. צלחת 200 מיקרוליטר מהריכוזים המתאימים על צלחות אגר הדם. אפשרו לחיידקים לגדול במשך שבעה ימים בתא אנאירובי, ואז ספרו את המושבות.