טכניקה להערכת לוקליזציה in vivo של נוגדנים ספציפיים לגידול
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:13 דק׳ • July 8th, 2025
קח תרחיף תאי סרטן שחלות אנושי. הוסף מדיום מטריצת קרום מרתף, ושמור על קרח כדי למנוע היווצרות ג'ל.
טען את התערובת למזרק והזריק תת עורית לעכבר עירום אתימי. הסר את המחט לאחר שהמטריצה עוברת ג'לציה, ומונע הוצאת התערובת.
היעדר תגובה חיסונית בעכבר חסר חיסון שומר על כדאיות התאים המוזרקים. חלבוני המטריצה החוץ-תאיים וגורמי הגדילה של הג'ל מספקים אותות מעודדי גדילה, ומקלים על היווצרות הגידול.
תאי גידול מבטאים יתר על המידה את קולטן החומצה הפולית הקשור לפני השטח אלפא-1, או FOLR1.
קח נוגדנים ספציפיים ל-FOLR1. הוסף צבע פלואורסצנטי ודגירה, מה שמאפשר צימוד צבע עם הנוגדנים.
הזריק תוך ורידי את הנוגדנים המסומנים לעכבר נושא הגידול המורדם
נוגדנים מגיעים לגידול דרך מחזור הדם ונקשרים ל-FOLR1 על תאי הגידול, ומסמנים באופן פלואורסצנטי את פני התא.
בצע הדמיה פלואורסצנטית in vivo. עם עירור, הצבע פולט פלואורסצנטיות, מה שמקל על הערכת מיקום הנוגדנים בגידול.
דיאליזה של 0.5 מיליליטר מהנוגדן באמצעות קלטת דיאליזה בליטר אחד של מאגר צימוד. לאחר ארבע שעות, העבירו את קלטת הדיאליזה למאגר טרי, ובצעו דיאליזה למשך הלילה. כדי להגדיר תגובת צימוד, הוסף 0.03 מיקרוגרם של IRDye 800CW לכל מיליגרם נוגדן בנפח כולל של 500 מיקרוליטר.
דוגרים על התערובת למשך שעתיים בחום של 20 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, טהר את המצומדים המסומנים על ידי דיאליזה נ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים