אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:18 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם תת-אוכלוסיות מקרופאגים M1 ו-M2 דבקות, הנבדלות על ידי סמני פני השטח הספציפיים שלהן. תאים אלה נגועים ב-Mycobacterium tuberculosis עם תווית פלואורסצנטית.
הוסף מאגר FACS לבארות התרבית.
EDTA במאגר מאפשר ניתוק תאים מבארות התרבית.
העבר את תרחיף התא לצינורות מיקרו-צנטריפוגה.
צנטריפוגה את הצינורות. השליכו את הסופרנטנט. השעו מחדש את התאים בקוקטייל נוגדנים נגד מקרופאגים מצומד פלואורוכרום וצבע חיות, Zombie-UV.
הצבע הקרינה זומבי-UV נכנס לתאים מתים דרך ממברנות פגומות ונקשר לחלבונים ציטופלזמיים, ומאפשר התמיינות ברורה מתאים לא מוכתמים ברי קיימא.
יתר על כן, הנוגדנים נגד מקרופאגים מצומדים פלואורסצנטיים נקשרים לאנטיגנים מטרה על המקרופאגים, ומאפשרים זיהוי דיפרנציאלי של תת-אוכלוסיות.
שטפו את התאים כדי להסיר נוגדנים לא קשורים. צנטריפוגה. הסר את ה-supernatant.
השעו מחדש את התאים במאגר קיבוע כדי להצליב חלבונים, לשמר את המורפולוגיה של התא ולהשבית את מיקובקטריות לטיפול בטוח במהלך הניתוח.
לבסוף, צנטריפוגה ועבד את הדגימות לזרימה ציטומטרית.
השתמש באסטרטגיית שער מתאימה כדי לקבוע את אחוז תת-האוכלוסיות הנגועות ב-Mycobacterium.
כדי לצבוע את התאים לצורך ציטומטריית זרימה, דגרו את התאים הנגועים ב-1 מיליליטר של מאגר FACS בתוספת 0.5 מילי-מולרי EDTA לבאר למשך 30 דקות לפחות. בתום הדגירה, אספו את התאים המנותקים עם
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים