בדיקת מבחנה לחקר היכולת ציטוטוקסית של תאי הרג הנגרמים על ידי ציטוקינים

קחו תרבית של תאים סרטניים עם חלבונים ציטופלזמיים עם תווית פלואורסצנטית.

הוסף תאי רוצח או CIK המושרים על ידי ציטוקינים - תאי T אפקטורים עם מאפיינים דמויי תאי הרג טבעיים - בעלי פעילות אנטי-גידולית.

קולטני D או NKG2D מקבוצת הרג טבעית 2 בתאי CIK נקשרים לחלבונים המעוררים לחץ על תאי הסרטן.

הקישור גורם לתאי CIK לשחרר רעלני גרגירים ציטופלזמיים - פרפורינים וגראנזימים.

פרפורינים יוצרים נקבוביות בקרום התא הסרטני, ומאפשרים כניסת גרנזימים, המפעילים קספאזות וגורמים לאפופטוזיס.

לאחר הדגירה, קצרו את התאים. הוסף צבע כדאיות תא קושר חומצות גרעין פלואורסצנטיות.

הצבע נכנס דרך קרום התא הפגוע ונקשר ל-DNA, וכתוצאה מכך תאים מתים מוכתמים כפולים.

עם קרום תא שלם, תאים חיים אטומים לצבע.

העבירו את התאים דרך ציטומטר זרימה כדי לזהות תאים חיים המציגים פלואורסצנטיות בודדת ותאים מתים עם פלואורסצנציה כפולה.

צור תרשים פיזור כדי למדוד את אחוז תאי הסרטן המתים, לכמת את ההשפעה הציטוטוקסית של תאי CIK.

כדי לבצע את הבדיקה הציטוטוקסית, תרבית משותפת CIK ותאי לוקמיה מיאלואידית כרונית אנושית K562, על ידי הוספת 1 מיליליטר של תאי K562 לכל באר בצלחת של 6 בארות בצפיפות של 0.5 מיליון תאים למיליליטר. לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר של מדיום בסיסי עם או בלי תאי CIK לצלחת 6 הבארות, כמפורט בפרוטוקול הטקסט. מערבבים את מתלי התאים על ידי פיפטינג