בדיקת הידבקות חוץ גופית לאיתור היצמדות של תאים סרטניים למלכודות חוץ-תאיות של נויטרופילים

במיקרו-סביבה הסרטנית, נויטרופילים מופעלים משחררים מלכודות נויטרופילים חוץ-תאיות, או NETs, המורכבות מסיבי DNA חוץ-תאיים, היסטונים וחלבונים גרגירים, הממלאים תפקיד מכריע בהתקדמות הסרטן.

כדי לחקור הידבקות של תאים סרטניים-NET במבחנה, הוסף תרחיף NET לבארות צלחות מרובות בארות. דגירה להיווצרות חד-שכבתית NET.

לאחר הדגירה, הסר NETs לא דבוקים.

הוסף תמיסת חלבון כדי לחסום אתרי קשירה חופשיים בבארות.

פיפטה סימנה תאים סרטניים פלואורסצנטיים על גבי חד-שכבות NET.

קולטני שטח ספציפיים על תאי סרטן מקיימים אינטראקציה עם NETs, ומקלים על הידבקות התאים.

לאחר הדגירה, השליכו מדיה מבאר הבקרה השלילית.

הוסף דאוקסיריבונוקלאז כדי לפרק NETs, לנתק את התאים.

הסר פתרונות מבקרה שלילית ובדוק בארות. השתמש במאגר כדי להסיר תאים שאינם נדבקים.

תקן את תאי הסרטן הדבקים ל-NETs עם פורמלדהיד.

באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, דמיין את תאי הסרטן הפלואורסצנטיים המודבקים ל-NETs.

בארות בדיקה מראות הידבקות משמעותית של תאי סרטן ל-NETs, בעוד ש-NETs שטופלו בדאוקסיריבונוקלאז מציגים רמות מופחתות של הידבקות תאים סרטניים.

הוסף 100 מיקרוליטר ממלאי ה-NET לכל באר של צלחת תחתונה שטוחה של 96 בארות, ודגר את הצלחת למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס בחושך כדי לצפות את הבארות. 12 עד 20 שעות לאחר מכן, השתמש במיקרוסקופ כדי לוודא היווצרות חד-שכבתית אחידה של NET