צביעת תאי חיידקים והכנה למחקרים אימונולוגיים

התחל עם צינור המכיל תרבית חיידקים בשלב האקספוננציאלי, מה שמבטיח חיידקים אחידים וגדלים באופן פעיל לתוצאות עקביות.

צנטריפוגה כדי לאסוף את התאים; לשאוב את הסופרנטנט המכיל פסולת, ולהשעות מחדש את התאים.

הכניסו צבע פלואורסצנטי אדום חדיר לתאים. מולקולות צבע חודרות לקרום התא החיידקי ומגיעות לנוקלואיד, נקשרות ל-DNA ומעניקות פלואורסצנטיות אדומה לחיידקים.

צנטריפוגה כדי לגלול את החיידקים המוכתמים ולשאוף סופרנטנט המכיל צבע לא קשור.

השעו מחדש את החיידקים למצע גידול כדי לשמור על כדאיות התאים.

בעזרת פוטומטר מודדים את ספיגת תרחיף החיידקים המדולל ב-600 ננומטר.

השווה את ערך הספיגה עם עקומה סטנדרטית כדי לקבוע את ריכוז החיידקים.

העבירו את הנפח הרצוי של תרחיף החיידקים המוכתם לצינור טרי המכיל מצע גידול. זאת כדי להשיג את ריכוז החיידקים הרצוי לזיהום בתא המארח המייצג את ריבוי הזיהום, או MOI.

החיידקים המוכתמים עם ה-MOI הרצוי מוכנים למחקרים אימונולוגיים.

ראשית, קצרו את תרביות החיידקים בשלב אקספוננציאלי על ידי צנטריפוגה ב-13,000 פעמים גרם למשך שתי דקות בטמפרטורת החדר. לאחר שטיפת גלולת התא עם מיליליטר PBS אחד, השעו מחדש את הגלולה החיידקית במיליליטר PBS אחד.

קבע את ריכוזי התרחיף החיידקי על ידי מדידת צפיפות אופטית ב-600 ננומטר. לאחר מכן, לצורך צביעת תרחיף החיידקים, הוסף שני מיקרוליטר של צבע מכתים ירוק או אדום מרוכז פי 500 למיליליטר אחד של תרחיף חיידקים כדי לדלל את הצבע פי אחד. דגרו את התאים בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות עם סיבוב עדין בחושך.

לאחר 30 דקות, צנטריפוגה של החיידקים המוכתמים ב-13,000 פעמים גרם למשך שתי דקות, והשעיה מחדש של הגלולה במיליליטר אחד של PBS. אוספים את תאי החיידקים המוכתמים על ידי צנטריפוגה ב -13,000 פעמים גרם למשך שתי דקות. השעו מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של מדיום F-12K טרי, ומדדו את הצפיפות האופטית של כל תרבית ב-600 ננומטר. לדלל את התרביות ברצף לריכוזים הרצויים, בהתבסס על ריבוי הזיהום וריכוז התאים המארחים.