איתור קישור ויטרונקטין למשטחים חיידקיים באמצעות ציטומטריית זרימה

0 views • 3:05 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קח צינורות ציטומטר זרימה המכילים זנים פראיים ומוטנטיים של המופילוס אינפלואנזה, סוג f.

פיפטה, חוצץ המכיל חלבונים חוסמים וויטרונקטין דגירה.

החלבונים החוסמים מפחיתים אינטראקציות לא ספציפיות על פני השטח של החיידקים, בעוד שמולקולות ויטרונקטין נקשרות לחלבון H, חלבון קושר ויטרונקטין, על משטחי חיידקים מסוג בר. בזן המוטנטי, ויטרונקטין אינו נקשר בגלל היעדר חלבון H.

צנטריפוגה. הסר ויטרונקטין לא קשור וחלבונים חוסמים.

הוסיפו חוצץ המכיל נוגדנים ראשוניים נגד ויטרונקטין, הנקשרים באופן ספציפי לויטרונקטין המחובר למשטחי החיידקים מסוג הבר.

לאחר מכן, הציגו נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור, הנקשרים לנוגדנים הראשוניים על ויטרונקטין ומקלים על זיהוי ויטרונקטין.

צנטריפוגה. הסר נוגדנים משניים לא קשורים. השעו מחדש חיידקים במאגר.

בצע זרימה ציטומטרית כדי לקבוע את קשירת ויטרונקטין למשטח החיידקים.

השווה את אותות הקרינה של זנים מסוג בר וזנים מוטנטיים. שינוי באות הקרינה בחיידקים מסוג בר מאשר את קשירת הוויטרונקטין לפני השטח של החיידקים.

כדי להתכונן לזרימה ציטומטרית, השעו מחדש את כדורי החיידקים עם 50 מיקרוליטר של מאגר חוסם המכיל 250 ננו-מולרי ויטרונקטין לאחר מכן, דגרו את הדגימות למשך שעה בטמפרטורת החדר מבלי לנער. לאחר הדגירה, גלולה את החיידקים על ידי צנטריפוגה ב-3,500 x גרם למשך 5 דקות. לאחר מכן שטפו את הכדורים שלוש פעמים באמצעות PBS ושלבי צנטריפוגה דומים.

לאחר הכביסה, הוסף 50 מיקרוליטר של נוגדנים רב-שבטיים נגד ויטרונקטין כבשים ראשוניים לגלולת החיידק, בדילול של 1 עד 100 ב-PBS/BSA. דגרו את המתלה למשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, שטפו את החיידקים שלוש פעמים עם PBS כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.

לאחר מכן, הוסף לגלולה 50 מיקרוליטר של PBS/BSA המכילים פלואורסצאין איזותיוציאנט נוגדנים נגד שבטי כבשים נגד כבשים. דוגרים בטמפרטורת החדר למשך שעה בחושך. לבסוף, לאחר שלושה שלבי כביסה, השעו מחדש את גלולת החיידקים עם 300 מיקרוליטר PBS, ונתחו לפי ציטומטריית זרימה.

08:17

Flow Cytometry מבוסס Assay עבור הניטור של פונקציות תא NK

Related Videos

0 Views

07:02

כימות האדם Norovirus וירוס כריכת כריכה של חיידקים קומנדסאל באמצעות זרימה Cy, לנסות

Related Videos

0 Views

10:43

קיטוב של M1 ו M2 תאים נגזרים מונוציט אנושי וניתוח עם Cytometry זרימה על זיהום שחפת Mycobacterium

Related Videos

0 Views

09:45

נעול חומצות גרעין תזרים cytometry פלואורסצנציה באתרו (LNA זרימה FISH): שיטה לגילוי חיידקי RNA קטנים

Related Videos

0 Views

18:07

ניתוח הפנמה נייד של חלקיקים וחיידקים על ידי Cytometry Multi-Flow דימות ספקטרלי

Related Videos

0 Views

03:53

מחקר לחקר תפקידו של ויטרונקטין בהיצמדות חיידקים לתאי אפיתל מארחים

Related Videos

0 Views

04:24

בדיקה לכימות הקשר של VLPs נורו-וירוס אנושי לחיידקי מעיים

Related Videos

0 Views

07:31

איתור של פלורסנט אינטראקציות Nanoparticle עם אוכלוסיות ראשוניות של תא חיסון על ידי זרימת cytometry

Related Videos

0 Views

09:39

טכניקות לניתוח של תאית שלפוחית ​​שימוש cytometry הזרימה

Related Videos

0 Views

07:25

מדידה מצורף והפנמה של שפעת וירוס בתאי A549 על ידי cytometry הזרימה

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026