הדמיה של חיידקים במקטעי ביופסיה של שלפוחית השתן באמצעות הכלאה פלואורסצנטית באתרו

התחל עם מגלשת זכוכית הנושאת קטע ביופסיה של רקמת שלפוחית השתן נגועה ונטולת שתן מיובשת המכילה חיידקים אורופתוגניים.

הציגו בדיקות אוניברסליות עם תווית פלואורסצנטית - אוליגונוקלאוטיד חד-גדילי משלים ספציפי לאזור השמור של RNA ריבוזומלי חיידקי 16s, או 16s-rRNA.

דגרו את המגלשה בחושך בטמפרטורה גבוהה להכלאה אופטימלית.

במהלך הדגירה, הבדיקות עוברות הכלאה בלעדית לאזור השמור על חיידקים 16s-rRNA, ומעניקים פלואורסצנטיות ירוקה לחיידקים.

לאחר הכלאה, יש לשטוף עם מאגר מחומם מראש כדי להסיר את הבדיקות הלא קשורות.

צבעו את קטע הרקמה בצבע Hoechst ובסמני חלבון תאיים עם תווית פלואורופור.

מולקולות הוכסט נקשרות ל-DNA, וצובעות את הגרעינים בכחול, בעוד שסמנים המסומנים בפלואורופור מקיימים אינטראקציה עם רכיבי תא ספציפיים כגון חוטי מוצין ואקטין, ומעניקים פלואורסצנטיות אדומה בקטע הביופסיה.

שטפו את השקופית והוסיפו אמצעי הרכבה לחלק הרקמות.

תחת מיקרוסקופ קונפוקלי, פלואורסצנציה ירוקה בתוך קטע ביופסיית שלפוחית השתן הנושאת פלואורסצנטי אדום מאשרת את החיידקים הקשורים לרקמה.

הכן תא לחות לכל בדיקה על ידי הוספת מגבון משימות ספוג, מקומט ועדין ומים סטריליים למאגר של קופסת טיפים P1000. הנח את מחסנית מחזיק הקצה למעלה, מכיוון שכאן יושבים השקופיות. בסיום הכביסה הסופית, הסר את השקופית ממתלה השקופיות, והנח אותם על מגבת נייר טרייה, כשצד