אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:54 דק׳ • July 8th, 2025
קח השעיה של תאי ג'ורקט - תאי לוקמיה לימפוציטים T.
ערבבו אליקוט עם צבע כדאיות התא והבטיחו מספר הולם של תאים חיים.
צלחת את התאים בצלחת תרבית ומרחו קרינה אולטרה סגולה C או UVC, למשך הזמן הנדרש.
UVC חודר לתאים ונספג על ידי ה-DNA, ויוצר תוצרי פוטו פירימידין.
לאחר הקרנה, דגרו על התאים. נזק נרחב ל-DNA בתיווך UVC מתחיל את מסלול האפופטוזיס הפנימי, ומפעיל חלבונים פרו-אפופטוטיים על הממברנה המיטוכונדריאלית החיצונית.
חלבונים מופעלים עוברים אוליגומריזציה, יוצרים נקבוביות ממברנה ומשחררים ציטוכרום C מהחלל הבין-ממברני לציטופלזמה.
קומפלקסים של ציטוכרום C עם הפרוטאז האפופטוטי המפעיל פקטור-1, ויוצרים קומפלקס אפופטוזום. האפופטוזום מפעיל קספאזות וגורם לאפופטוזיס.
הציגו את נספח V עם התווית פלואורופור כדי לסמן פוספטידילסרין על הממברנה, סמן תא אפופטוטי, והוסיפו פרופידיום יודיד שנכנס דרך הממברנה הפגועה כדי לסמן את ה-DNA.
באמצעות ציטומטריית זרימה, קבע את התאים האפופטוטיים המוקדמים המסומנים בנספח V ותאי אפופטוטיקה מאוחרים מוכתמים כפולים.
התחל בתרבית תאי T של ג'ורקאט במדיום תרבית תאי בסיס, בתוספת לפי הוראות כתב היד, ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. תאי T של ג'ורקאט הם קו תאי הרחקה שניתן לשמור עליו באמצעות מעבר למצע תרבית מחומם מראש כל שלושה ימים.
הכן תאים אפופטוטיים על ידי גידולם למפגש של 90%, שלוקח שלושה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים