אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:37 דק׳ • July 8th, 2025
קח צינורות ציטומטריים המכילים תערובת צביעה הכוללת נוגדנים חד-שבטיים בעלי תווית פלואורסצנטית התלויים במאגר גירוי.
הוסף ריכוזים יורדים של אלרגן הבדיקה למספר צינורות. הוסף נוגדנים נגד IgE לשפופרת אחת כדי לשמש כבקרה חיובית בתיווך IgE, והוסף חוצץ לצינור אחר לבקרה השלילית.
הזרימו דם היקפי אנושי לתוך הצינורות. דגירה.
אם האדם רגיש לאלרגן הבדיקה, חשיפה זו גורמת לאלרגן להיקשר לנוגדני IgE הספציפיים לאלרגן הקשורים לקולטני Fc על פני השטח של הבזופיל.
אלרגנים מצלבים קולטני IgE הקשורים ל-IgE, וגורמים להפעלת בזופילים.
בזופילים עוברים דה-גרנולציה, ומשחררים גרגירים תוך-תאיים המכילים מתווכים דלקתיים, עם ויסות מוגבר של מולקולות CD63 ו-CD203c.
נוגדנים חד-שבטיים המסומנים באופן פלואורסצנטי נקשרים ל-CD63, CD203c ו-CCR3 על בזופילים, בהתאמה.
הורד את הטמפרטורה כדי לעצור את פירוט הבזופילים.
הוסף חיץ לאריתרוציטים ליז ותקן את התאים.
בעזרת ציטומטר זרימה, זהה את הבזופילים מאוכלוסיית הלימפוציטים.
באמצעות CD63 כסמן הפעלה, נתח את הפעלת הבזופיל בריכוזי אלרגנים פוחתים.
התחל באיסוף דם היקפי בצינורות הפריניזציה של 9 מיליליטר, והנח את הדגימות ברוטור כדי לשמור עליהן בטמפרטורת החדר עד שהן נדרשות לפרוטוקול הניסוי.
סמן שני צינורות ציטומטר של 5 מיליליטר כל אחד לבקרה שלילית ובקרה חיובית. כמו כן, סמנו שפופרת אחת עבור ריכוזי האלר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים