אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:02 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צלחת המכילה זחלי דג זברה משובצים באגרוז, מורדמים וטרנסגניים המבטאים את החלבון הפלואורסצנטי הניתן להמרה בלויקוציטים שלהם - תאי חיסון פגוציטים.
השלפוחית האוטית השמאלית, שהוזרקה מראש בחיידקים אדומים עם תווית צבע פלואורסצנטי, ממוקמת שטוחה כנגד תחתית הצלחת.
בתוך השלפוחית האוטית, חיידקים שהוזרקו מראש גורמים לזיהום מקומי, מעורר נדידת תאי חיסון ושחרור כימוקין, מה שגורם לחדירת לויקוציטים לשלפוחית האוטית.
תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, התבונן בגיוס הראשוני של לויקוציטים ירוקים ופגוציטוזיס של חיידקים אדומים על ידי לויקוציטים באתר ההדבקה.
האירו את השלפוחית האוטית באורך גל של 405 ננומטר, והפכו באופן בלתי הפיך את החלבון הפלואורסצנטי הניתן להמרה מירוק לאדום והקנו פלואורסצנטיות אדומה ללויקוציטים - מה שמאפשר הדמיה מובהקת ומעקב מדויק שלהם.
כעת, בחנו את הזחלים בשני אורכי גל שונים בעומקים שונים, מה שמאפשר הדמיה של לויקוציטים פלואורסצנטיים אדומים וירוקים שנותרו.
לויקוציטים אדומים שהומרו לאור מתפזרים מהשלפוחיות האוטיות ומתפזרים בכל הגוף, מה שמקל על מעקב אחר לויקוציטים מבוססי המרה לאור.
לאחר הכנת אגרוז עם טריקאין על פי פרוטוקול הטקסט על במת הסטריאומיקרוסקופ, השתמש בפיפטה העברה כדי להניח ארבעה עד חמישה זחלים מורדמים בכלי תחתית זכוכית. מוציאים את תמיסת הטריקאין והאגרוז מאמבט המים של 55 מעלות צלזיוס, ונ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים