טכניקה למיצוי חומצות גרעין מדם בתיווך חלקיקי זכוכית מגנטית

קח צינור המכיל דם אנושי טרי והוסף מאגר ליזיס.

חומר הניקוי במאגר מחלחל לקרום התא, משחרר את התאים ומשחרר חומצות גרעין תוך-תאיות, או NAs, ונוקלאזות.

חומרים כאוטרופיים במאגר מנטרלים נוקלאזות, ומונעים פירוק NA.

הוסף חלקיקי זכוכית מגנטיים או MGPs - חלקיקים מגנטיים מצופים סיליקה - וערבב היטב.

ה-pH הנמוך של המאגר מביא פרוטונציה לסיליקה, ויוצר מטען חיובי על פני השטח של ה-MGPs.

NAs טעונים שלילית נקשרים אלקטרוסטטית למשטח הטעון, ויוצרים קומפלקס NA-MGP.

תחת שדה מגנטי, קומפלקסים של NA-MGP נאספים בצד הצינור.

השליכו את הסופרנטנט המכיל פסולת תאים וחלבונים.

בצע שלבי כביסה מרובים על ידי השעיית קומפלקסי NA-MGP במאגר כביסה, הפעלת שדה מגנטי לאיסוף הקומפלקסים והשלכת הסופרנטנט עם המזהמים הנותרים.

השעו מחדש קומפלקסים במאגר פליטה. ה-pH הגבוה משבש את האינטראקציה בין NA ל-MGP, ומשחרר את ה-NAs. ה-NAs המנופחים מוכנים לבדיקות במורד הזרם.

כדי לטהר חומצות גרעין מהדם שנאסף, ערבבו שוב את תכולת הצינור על ידי היפוך צינור הוואקום ביד 5 עד 10 פעמים. שפכו את המנה המוכנה של MGPs ישירות לתוך צינור איסוף הדם, ולאחר מכן, הניחו מכסה חדש מצינור איסוף דם שאינו בשימוש על הצינור המכיל את הדגימה. הנח אצבע על המכסה כדי לוודא שהצינור סגור היטב, וערבב את תכולת הצינור על ידי היפוך 5 עד 10 פעמים.

הנח את הצינור במחזיק המגנטי ושמור אצבע על המכסה כדי להבטיח שהצינור סגור היטב. לאחר מכן, הפוך את המחזיק המגנטי עם הצינור כמה פעמים כדי לפזר את ה-MGPs לפני שהם נאספים בצד הצינור עם המגנט. הסר את מכסה הצינור והשליך את תכולת הצינור לצינור איסוף של 50 מיליליטר באמצעות פיפטה חד פעמית.

יוצקים את המנה המוכנה של WB1 ישירות לתוך צינור איסוף הדם, וסוגרים את המכסה על הצינור. מערבבים את התוכן ביד 5 עד 10 פעמים. לאחר מכן, אסוף את החרוזים בצד הצינור באמצעות המגנט, והסר את הנוזל כמו קודם. השעו מחדש את החרוזים ב-aliquot המוכן של WB2. לאחר מכן, השליכו את התמיסה וחזרו על ההליך עם ה-aliquot המוכן של WB3.

לבסוף, הסר את הצינור מהמחזיק המגנטי ושפך את המנה המוכנה של EB ישירות לתוך צינור איסוף הדם. הנח את המכסה על הצינור, והשהה מחדש את ה-MGPs על ידי הקשה 5 עד 10 פעמים באצבע. לבסוף, השתמש בפיפטה חד פעמית של 1.5 מיליליטר כדי להעביר טיפה אחת של ה-MGPs המרחפים לתערובת תגובת ההגברה של חומצות הגרעין במורד הזרם.