אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 7:53 דק׳ • July 8th, 2025
הכן שקופית תא עם שכבת שומנים דו-שכבתית, או SLB, המורכבת מפוספוליפידים ופוספוליפידים ביוטיניליים.
הוסף חלבונים חוסמים כדי למנוע אינטראקציות לא ספציפיות.
הכניסו סטרפטווידין, שנקשר לפוספוליפידים ביוטיניליים.
הוסף נוגדנים נגד CD16 ביוטיניליים עם תווית פלואורסצנטית, הנקשרים לסטרפטווידין המשותק.
פיפטה D-ביוטין למניעת קשירה לא ספציפית של סטרפטווידין לתאים.
הכניסו תאי הרג טבעיים, או NK. קולטני CD16 בתאים אלה נקשרים באופן ספציפי לנוגדנים נגד CD16 הקשורים ל-SLB, ויוצרים סינפסה אימונולוגית.
קשירה זו מפעילה סידור מחדש של אקטין וקיטוב מיקרו-צינורות, ובסופו של דבר יוצרת מיקרו-אשכולות במרכז הסינפסה המכילים נוגדנים נגד CD16 הקשורים ל-SLB וקולטני CD16.
גרגירים ליטיים המכילים פרפורין מקטבים וחודרים דרך חוטי אקטין בסינפסה.
תקן את התאים. לחדור את הממברנות ואת SLB.
הוסף נוגדנים פלואורסצנטיים ואנטי-פרפורין, הנקשרים לחוטי אקטין ופרפורין, בהתאמה.
באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי ברזולוציה גבוהה, דמיין את התפלגות חוטי האקטין הפלואורסצנטיים והגרגירים החיוביים לפרפורין בסינפסה.
כדי להרכיב את שכבת השומנים המישורית הנתמכת בזכוכית, ראשית, הכינו 100 מיליליטר תמיסת פיראנה על ידי ערבוב של 30% מי חמצן עם חומצה גופרתית ביחס של 1 עד 3 בכוס. לתוך תמיסה זו, הניחו שני כיסויים מלבניים #1.5 למשך 20 עד 30 דקות. בזמן ניקוי הכי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים