אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:40 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם כדור תא המכיל תאי הרג טבעיים או תאי NK, ותאי מטרה צבועים פלואורסצנטית.
השעו מחדש את הגלולה במדיום מתאים ודגרו.
תא ה-NK מקיים אינטראקציה באמצעות חלבוני הידבקות פני השטח, ויוצר סינפסה אימונולוגית עם תא המטרה.
זה יוזם איתות של תאי NK, ומשחרר גרגירים ציטוטוקסיים, המכילים פרפורין וגרנזימים לתוך הסינפסה.
פרפורין, חלבון יוצר נקבוביות, יוצר תעלות בקרום תא המטרה, ומאפשר לגראנזימים להיכנס לציטופלזמה.
גרנזים, סרין פרוטאז, מקיים אינטראקציה עם חלבונים תוך-תאיים, ומפעיל את המסלול האפופטוטי בתא המטרה.
כעת, הוסף צבע פלואורסצנטי פרופידיום יודיד.
הצבע נכנס לתאים מתים דרך הממברנות הפגועות שלהם ונקשר ל-DNA על ידי אינטרקלינג בין זוגות הבסיסים שלו.
כתוצאה מכך, התאים המתים מבטאים פלואורוכרום כפול ואילו התאים החיים מבטאים פלואורוכרום יחיד.
הדגימה מוכנה לזרימה ציטומטרית כדי להעריך ציטוטוקסיות הנגרמת על ידי תאי NK על ידי כימות מספרי תאי מטרה מתים וחיים.
כדי להכין דגימת בדיקת ציטוטוקסיות, סמן תחילה צינורות של 1.5 מיליליטר עבור כל דגימה ו/או משתתף לפי הצורך, ופיפטה את היחס הרצוי של תאי NK, ותאי K562 המסומנים ב-DiO לכל צינור.
אסוף את התאים על ידי צנטריפוגה, והסר בזהירות את הסופרנטנט מבלי להפריע לכדור התא. לאחר מכן, השעו מחדש את תערובת התאים ב-500 מיקרוליטר של מדיום תאי NK לא שלם, ותייגו את התאים בכל צינור ב-5 מיקרוליטר של פרופידיום יודיד.
אוספים את התאים באמצעות צנטריפוגה נוספת, ודוגרים על התרבית הקרה ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים. בתום הדגירה יש לצנטריפוגה את התאים באותם תנאי צנטריפוגה, ולהשעות את הגלולה ב-25 מיקרוליטר של מדיום תרבית תאי NK טרי ושלם.